【求助】奇怪的SDS-PAGE求助

最新回复

• gogo (2013-12-07 20:23:36)

  QUOTE:

  原帖由 ssonglikihi 于 2013-12-7 20:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  各位前辈！
  最近有一个包涵体蛋白，用8M Urea+200mM DTT变性溶解，做复性，结果出现很奇怪的电泳结果。我确认我的2×loading buffer 和 胶的SDS的量肯定是对。但是，为什么加了尿素和DTT的包涵体跑胶的时候都有2二聚体呢？不知 ...

  是杂蛋白吧

• ssonglikihi (2013-12-07 20:24:13)

  不是，变性条件下Ni-IDA的时候也有。

• gogo (2013-12-07 20:24:49)

  QUOTE:

  原帖由 ssonglikihi 于 2013-12-7 20:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  不是，变性条件下Ni-IDA的时候也有。

  Ni柱结合杂蛋白也很正常

• ssonglikihi (2013-12-07 20:25:03)

  挂过空载质粒的菌，没有那么一条带，而且那条带跟目的条带的之间大小刚好是2倍左右，而且如果单体不明显的话，二聚体就很明显。

• gogo (2013-12-07 20:25:41)

  那就是你的这么二聚体不是通过二硫键连接的，有可能是其他力，比如疏水作用。还有你做这个有什么目的呢

• ssonglikihi (2013-12-07 20:26:15)

  正常的SDS的浓度不能打开疏水作用？这个是新做的一个蛋白的复性，之前做的2个蛋白都没有这种情况，这个比较明显。而且很奇怪！

• gogo (2013-12-07 20:26:35)

  SDS 闻一下有没有味道？

• vvmmoy (2013-12-07 20:27:08)

  很正常，样本加2*Laemmli Buffer后煮一下就打开二聚体了

• ssonglikihi (2013-12-07 20:27:27)

  
  2*Laemmli Buffer的作用和配方有吗？

• ssonglikihi (2013-12-07 20:29:06)

  
  Laemmli Sample Buffer (4X)
  40% (v/v) Glycerol
  0.02% (w/v) Bromophenol Blue
  4% (w/v) 2-Mercaptoethanol or 3.1% (w/v) DTT
  8% (w/v) SDS
  250 mM Tris
  貌似跟我们常用的loading buffer 一样， 跑胶的时候 最后就像我上图显示的那样！
  还是我理解错了？