【求助】NP—40裂解液的配方

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-12-07 20:49 作者: @STAR@ 来源: 分析测试百科网

请问大家有没有在提取组织蛋白（骨骼肌蛋白）时用NP—40裂解液的，我这里有个配方不知道行不？
NP-40（膜蛋白提取裂解液）：
Tris：50ml；EDTA：15mmol/l；NaCl：150mmol/l；NP-40：1%。PH=8.0
配置50ml，需
Tris：50ml*10-3*50*10-3*121.1=0.30275g
NaCl：50ml*10-3*10*10-3*58.44=0.4383g
EDTA：50ml*10-3*15*10-3*372.24=0.279g
NP-40：50ml*1%=0.5ml=500ul
调PH=8.0时，加500ulNP-40，然后定容（加ddH2O）至50ml，室温保存数月。
谢谢各位了！

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【求助】NP—40裂解液的配方

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最新回复

gmjghh (2013-12-07 20:49:29)

这样的配方，膜蛋白提取效率不高！
二丫头466 (2013-12-07 20:49:51)

QUOTE:
原帖由 gmjghh 于 2013-12-7 20:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

这样的配方，膜蛋白提取效率不高！
能否赐教？我用0.5%triton，其他差不多，感觉还有很多没溶出来...
gmjghh (2013-12-07 20:50:25)

可以使用上海生工的试剂盒，质量好，价格便宜！

膜蛋白提取试剂盒
Membrane Protein Extraction Kit
产品说明：本试剂盒提供独特的组份提取细胞及组织中的膜蛋白。特殊的提取Buffer在裂解细胞的同时，经过特殊处理，还可以选择性地分离提取细胞膜蛋白和胞器质膜蛋白。提取方法简单，可靠，快速。获得的膜蛋白纯度高，可用于SDS-PAGE电泳、 Western Blot、免疫共沉淀,细胞信号传导等后续研究, ,每次可以提取107个培养细胞或200mg动物组织，本试剂盒可以使用50次。储存条件：2-～8℃。
产品特点：
1．整个操作过程只需要60分钟左右;
2．即可以用于培养细胞（50x107个），有可以用于动物组织（50x200mg）蛋白质的提取;
3．避免蛋白酶对蛋白质的降解，保持膜蛋白质的完整性和天然活性;
4．提取的膜蛋白纯度高,不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
编号  包装  价格  产地
BSP049  50 Assays  380  生工
@STAR@ (2013-12-07 20:50:50)

QUOTE:
原帖由 gmjghh 于 2013-12-7 20:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
可以使用上海生工的试剂盒，质量好，价格便宜！

膜蛋白提取试剂盒
Membrane Protein Extraction Kit
产品说明：本试剂盒提供独特的组份提取细胞及组织中的膜蛋白。特殊的提取Buffer在裂解细胞的同时，经过特殊处理，还可以选 ...
谢谢，你做实验用的就是这个吗？不过除了这个还有没其他的配方或方法呢？谢谢哦
@STAR@ (2013-12-07 20:51:24)

QUOTE:
原帖由 二丫头466 于 2013-12-7 20:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

能否赐教？我用0.5%triton，其他差不多，感觉还有很多没溶出来...
能分享你蛋白提取的裂解液是什么配方呢？RIPA 还是NP—40？谢谢
ns5fan (2013-12-07 20:52:54)

建议不要自己配裂解液，我们做过对照，用这个配方的裂解液和试剂盒的裂解液对比，提出的蛋白质量不如试剂盒的效果好。
我们实验室都用碧云天的裂解液，价格不贵，效果也不错。还有博奥森的也可以。
feima+ (2013-12-07 20:53:23)

我们实验室一直用上海生工的膜蛋白提取试剂盒，效果比较好！
二丫头466 (2013-12-07 20:53:51)

QUOTE:
原帖由 @STAR@ 于 2013-12-7 20:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

能分享你蛋白提取的裂解液是什么配方呢？RIPA 还是NP—40？谢谢
我处理的是细胞，而且较大量，仅仅用平时用的缓冲液加0.5%的triton，溶出效果不算太好，曾试过NP40，对我的蛋白溶出效果与triton相近。