【求助】western 拖尾

最新回复

• vtongli (2013-12-07 21:39:53)

  
  蛋白量太大？上样时溢出加样孔？

• yayya (2013-12-07 21:40:14)

  上样量基本都在5ul上下，量比较少，用的是1.5mm，15孔的梳子，样品都沉在梳孔底部，一般不会溢出加样孔呀！

• wawa (2013-12-07 21:40:36)

  
  1.上样量大了·~不在于你上样的体积，而在于你上样的总量。你测过浓度没有？一般上样量不超过40ug。
  2.污染。电泳液被污染也会出现一样的问题。建议每次使用新的电泳液。
  3.考虑有没有弥散，最好染胶看看。

• yayya (2013-12-07 21:40:58)

  
  首先要谢谢您的宝贵意见~~
  1.我样品做了蛋白定量，是按50ug的上样量算出的上样体积，看来是上样量有些大
  2.电泳液我是配好的10乘的，每次用之前现稀释，用一次就不回收利用了，这样会不会有问题呀？
  3.还想问转膜会不会造成这种问题呀？
  谢谢啦~~

• ns5fan (2013-12-07 21:41:15)

  我的Marker 也有拖尾的现象。不是条带，而是成长方形，我电泳的时间是60V 30min 90v 120min ？高手分析下！谢谢

• xiaoxiaoniao (2013-12-07 21:41:44)

  QUOTE:

  原帖由 ns5fan 于 2013-12-7 21:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  我的Marker 也有拖尾的现象。不是条带，而是成长方形，我电泳的时间是60V 30min 90v 120min ？高手分析下！谢谢

  你的什么牌子的marker？有时候是marker自己的问题，做的不好的预染marker是容易弥散。

• xiaoxiaoniao (2013-12-07 21:42:02)

  你首先应该确认你的跑的胶有没有问题？可以染胶来看看。我推荐fangweibing119制作的快速染胶液，很不错的。其次，我觉得转膜出现拖尾的情况一般比较少。

• xiaoxiaoniao (2013-12-07 21:43:19)

  忘记说了，你可以减少上样量后来看看。

• nikun230 (2013-12-07 21:43:42)

  
  我的也经常出现拖尾的现象！加样量在30ug左右啊~！希望高手能帮我解决！非常感谢

• vcve (2013-12-07 21:44:06)

  跟浓缩胶的配置有关系么？！

• 2541 (2013-12-07 21:44:24)

  
  以前实验室也出现过拖尾的事情，后来换了个loading buffer和改进了电泳buffer就好了。当时实验室老师解释说是loading buffer里的Beta－巯基乙醇跑光了，SDS析出过多了，或者是电泳Buffer搁置时间过长，SDS析出过多，都不给力，不能带动蛋白跑了。所以出现拖尾现象
  我们以前实验室也是电泳buffer配个1X的 5L，大家一起用，一用用1个月左右，容器底部可以看到有大量的SDS析出的。
  建议楼主电泳缓冲液还是不要一次性配置过多。