【求助】过柱子之后的曲线图

最新回复

• niangao1980 (2013-12-07 23:02:35)

  
  洗脱拖尾或两峰重叠，就这样的，没什么特别的。

• 兔纸 (2013-12-07 23:02:54)

  QUOTE:

  原帖由 12xunmei 于 2013-12-7 23:02 发表
  过了柱子之后的曲线图。红圈圈划出来的部分，说峰不是峰的，我做的几次都有这种现象，问问大家这是什么原因呢？

  很正常

• PINK (2013-12-07 23:03:13)

  
  叠峰了

• 7437654 (2013-12-07 23:03:31)

  会不会是流速太快了.....???

• 12xunmei (2013-12-07 23:03:59)

  QUOTE:

  原帖由 niangao1980 于 2013-12-7 23:02 发表
  
  洗脱拖尾或两峰重叠，就这样的，没什么特别的。

  
  我的流速是5ml/min，不知道快不快。15ml的柱子。我分别用150，300,500,1000mM的盐洗脱的。图片显示到500mM洗完。每个峰收集的体积都不少，我想透析完后冻干。就是不知道这样做了之后还能不能检测到我的酶活性。曲线显示峰值的蛋白浓度已经很低了，我上样前的OD280是65。我特别担心下一步要做的时候检测不到活性了。

• kswl870 (2013-12-07 23:04:22)

  QUOTE:

  原帖由 12xunmei 于 2013-12-7 23:03 发表
  
  
  我的流速是5ml/min，不知道快不快。15ml的柱子。我分别用150，300,500,1000mM的盐洗脱的。图片显示到500mM洗完。每个峰收集的体积都不少，我想透析完后冻干。就是不知道这样做了之后还能不能检测到我的酶活性。曲线显示 ...

  个人意见是太快了....

• 12xunmei (2013-12-07 23:04:45)

  QUOTE:

  原帖由 kswl870 于 2013-12-7 23:04 发表
  
  
  个人意见是太快了....

  
  呃，快了。你做的都是什么速度呢？
  一个老师还说sephadex快点没关系。我如果上300ml的大柱子流的太慢的话不是要拖很久么?这样据说对蛋白的活性也不好……
  我搞不清了

• kswl870 (2013-12-07 23:05:37)

  我没有做过sephadex.但是在做nickel column的时候也出现过双峰,当时放慢流速之后双峰的现象确实好了很多.
  
  1ml/min应该是比较标准的速度.
  
  这个柱子是你自己装的还是现成的,如果装的不好,也可能会出现双峰.
  
  不过反正最后你要浓缩制成干粉,对后续步骤没有影响,双不双峰无所谓....蛋白没有通用的protocol,你只能多试试看.

• 12xunmei (2013-12-07 23:06:01)

  我自己装的，还费了好大劲的说。
  对了，收集峰处的液体后是不是要立即透析啊，然后再冻干。常温也没关系的吧？

• kswl870 (2013-12-07 23:06:26)

  QUOTE:

  原帖由 12xunmei 于 2013-12-7 23:06 发表
  我自己装的，还费了好大劲的说。
  对了，收集峰处的液体后是不是要立即透析啊，然后再冻干。常温也没关系的吧？

  哦...透析都应该在4度吧......不过不知道你的蛋白是否稳定,透析也有损失...但是直接冻干样品里会有盐....只能试了...你要是有超滤的tube也可以试....