【求助】电泳老是会出现严重的纵向拖尾

最新回复

• seagate (2013-12-07 23:41:09)

  
  是不是你的蛋白里有杂质，比如盐分很多或是有去污剂之类的啊

• mingming0638 (2013-12-07 23:41:51)

  
  我们实验室经常跑电泳，你的问题应该是你制作的胶的问题，Tris-HCl用浓盐酸和稀盐酸调都没关系，你查查是不是你配制的丙烯酰胺的问题，再查查你的药品，另外我推荐你用宝生物试剂书上5*SDS PAGE配方效果不错

• eric930 (2013-12-07 23:42:11)

  
  电泳样品中有沉淀，上样前离心，取上清上样。

• youreyes (2013-12-07 23:42:31)

  
  多谢各位战友的指点！
  我跑一向的时候，电流最大也就十几微安，应该样品中盐离子这些不是很多。不过在平衡的时候，是不是应该先用双蒸水将胶条冲一下，以便冲去去污剂呢？
  另外，我看书上说，Tris-HCl调pH的时候，温度有变化对pH也有影响的，那么不知道，调pH的时候需要注意哪些问题呢？
  还请各位战友多多指点，感激涕零！

• dior (2013-12-07 23:42:51)

  
  平衡前可冲可不冲，影响不大，如果冲洗的话，一般是冲洗支持面，将覆盖油洗净，注意不要不要损坏胶面。现在一般的实验室里都有空调，温度对pH的影响不会很大。

• coolcool (2013-12-07 23:43:16)

  
  我以前也遇见过这种问题，调下pH值就会有很大的改观。我们用的是浓盐酸，国产进口都可以。有可能是你做胶的那些试剂pH值升高的问题。都要调回来。

• youreyes (2013-12-07 23:43:42)

  
  多谢dior战友，我再试试调pH看一下效果！
  

• hyuu (2013-12-07 23:43:59)

  
  我也一直很困惑Tris-Hcl的pH值问题，它随温度的变化太大了，常说的pH8.8的Tris-HCL是指在4度时pH为8.8，还是在室温配制的时候调到8.8就行？我个人觉得应该是在4度时调到8.8，希望高手给点意见

• 二子 (2013-12-07 23:44:18)

  
  我也遇到相同的问题。请问你用什么电泳槽跑的第二向？

• ztonyc (2013-12-07 23:44:38)

  我也觉得是样品不纯，可能有其他杂质。
  离心，取上清，没有沉淀，图谱会更干净

• PCR (2013-12-07 23:45:10)

  I think it refers to the pH at room temperature.
  It is not practicable to adjust pH at 4 C!
  And you run the gel at room temperature, too.
  Theoretically, It should be pH 8.8 when you run the gel.
  
  ============================================
  
  我也一直很困惑Tris-Hcl的pH值问题，它随温度的变化太大了，常说的pH8.8的Tris-HCL是指在4度时pH为8.8，还是在室温配制的时候调到8.8就行？我个人觉得应该是在4度时调到8.8，希望高手给点意见

• xue258 (2013-12-07 23:45:32)

  
  我也遇到了相似的问题。条带稍微有些托尾，在以前的实验室从没遇到过这种现象！
  我怀疑：a，可能Tis－HCl的pH不太准确；b,30％的Acr－Bis我之前用的都是自己配制的，现在用的是买的康润的，可能有点问题；c,蛋白Marker也买的康润的，marker比我的蛋白条带还要托，模模糊糊的，不知道是marker本身有问题，还是其他原因；
  另外，我现在用的电泳槽是伯乐新出的那款，可以一次跑4板胶，比较费电泳液。每次电泳开始时电压加到60V，电流就很大，第二相时只能90－100V的跑。我之前用的是两板胶的那种槽子，电泳时都是80V和120V的跑。我不知道是因为电泳液多了电流就高了吗？

• txwuyan (2013-12-07 23:45:56)

  我遇到过这样的问题，试过7次，后来居然找到原因了。
  你必须将你的详细步骤贴出来，最新款的电泳槽的图片贴上来，才好分析。
  还有请问你在哪个大学做实验。我想找一个长期做双向的人，建立一个群，可以随时交流，提高效率，及时解决问题。