mdr1和GSTπ基因缄默逆转K562/A02细胞多药耐药性的研究

为了研究短发夹状小分子干扰RNA(short hairpin RNA，shRNA)对白血病多药耐药细胞株K562/A02 mdr1和谷胱甘肽S-转移酶(GST)π基因的表达和功能的影响。研究者根据mdr1mRNA第79～99位和GSTπ mRNA第308～327位核苷酸为作用靶点，合成针对靶区域序列的shRNA，克隆入pSilencer2.1-U6 neo，克隆产物为pSilence-mdrl和pSilence-GSTπ，转染K562/A02细胞株。用实时荧光定量PCR检测K562/A02细胞mdr1和GSTπ mRNA的表达；MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞半数抑制浓度(IC50)。结果经pSilence-mdr1转染后的K562/A02细胞mdr1 mRNA表达量下降了71.5%，从(2.80±1.65)×108拷贝/μgRNA下降至(3.90±2.37)×107拷贝/μg RNA(P＜0.01)；同时pSilence-GSTπ作用后，K562/A02细胞GSTπ mRNA表达量较对照组下降了39.8%，从(2.30±1.14)×105拷贝/μg RNA下降至(5.40±2.45)×104拷贝/μg RNA(P＜O.01)；空载体转染后阿霉素的耐药指数为23，pSilence-mdr1转染后为8，pSilence-GSTπ转染后为10，差异有统计学意义(P＜0.01)。可见shRNA可有效逆转K562/A02细胞mdr1和GSTπ的多药耐药性。