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【求助】我的聚丙烯酰胺为什么不凝固
这两天想做SDS-PAGE,可是分离胶怎么也不凝固,做了几次都不凝固。七月中旬做的时候还是好好的。开始想是不是现在温度低了,今天放到30摄氏度试了试,还是不凝。我的过硫酸铵表面有点潮解板结,我把表面去掉,取了下层做了一下,发现30%的丙烯酰胺储存液直接加AP和TEMED可以凝固,但加上水或分离胶缓冲液等就不凝了。不知道什么原因,希望有经验的朋友赐教!【求助】我的聚丙烯酰胺为什么不凝固
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最新回复
6327555 (2013-12-09 15:15:08)
肯定是AP的问题,买新的AP吧,配好后分装1ml一管,-20度保存,用的时候取一管。分离胶配好后要覆盖一层水,与空气接触会妨碍胶的凝固
wmp1234 (2013-12-09 15:15:49)
水疱
我用的是固体过硫酸铵,然后每次用现配的,分离胶用水泡和的正丁醇覆盖的,以前做的差不多40分钟到一个小时凝固,现在放一个晚上也不凝固。过硫酸铵过期或潮解影响大吗?我买的过硫酸铵上面也没想生产日期及有效期。
dongdongqiang (2013-12-09 15:17:40)
固体AP也很容易过期。换吧!
greenbee (2013-12-09 15:18:35)
我也遇到过这种情况,最后也没弄明白为什么不凝,后来我只能多加一点TEMED了,对了,检查一下你的10%SDS,按照标准的方法重配一下。
ritou1985 (2013-12-09 15:19:38)
flower-201 (2013-12-09 15:22:03)
DNA (2013-12-09 15:23:01)
我也遇到这样的问题,但到现在都没有弄明白
abc816 (2013-12-09 15:23:20)
AP过期了吧,或者你可以加大AP和TEMED的添加量。
dongdongqiang (2013-12-09 15:24:26)
AP肯定是过期了。换了试试
flower-201 (2013-12-09 15:24:56)
换AP吧,肯定是它的问题,其实不用现配现用,一次配多点,分装-20度保存,每次用取一小支,现在天气温度不算低用几周都没问题。
DNA (2013-12-09 15:25:15)
肯定是你的AP有问题,决定胶凝固的只有AP和TEMED,而后者仅仅只是提供金属离子,关系到胶的软硬程度,前者才是控凝时间的关键,你可以加大AP量(没事的,只是缩短时间罢了,与胶浓度无关),当然最好重新买AP(你是肯定得重买,冬天你能怪温度,都丢30°了就只能说明是AP的原因了)
abc816 (2013-12-09 15:25:46)
49888 (2013-12-09 15:26:33)
我的经验是仔细检查一下你的AP配制的浓度到底是不是对的?我曾经有一次配的稀了,怎么也不凝固。其实也不一定要现配先用。在四度放置,用一个星期不是问题。
xue258 (2013-12-09 15:27:03)
remenb (2013-12-09 15:33:54)
我最近配胶也是不凝,我怀疑是温度是原因,所以我直接把胶架放60度水浴箱里半小时,最后凝了,最后内参也做出来了。但是有点模糊,不知道和胶有没有关系。
remenb (2013-12-09 15:37:13)
前几天 借用别人的APS,胶凝的非常好,看来还是APS的问题。
黄永 (2013-12-10 19:49:25)
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