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【求助】WB配胶问题~~头疼
如题，实验室新买了台WB的机器，一切都好，就是电泳拔梳子的时候玻璃和梳子抓的很紧，每次拔的时候都很费劲，导致胶常常变形，以前那个BIO-RAD的也没这个问题，会不会是我的胶凝时间不够长？【求助】WB配胶问题~~头疼
Ps：我的浓缩胶一般凝30min左右就开始电泳，还有我的梳子是在缓冲液中拔的。
希望知道的大侠指点下哎！
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【求助】WB配胶问题~~头疼
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-12-13 22:52 作者: 惊醒ing 来源: 分析测试百科网
最新回复
cocacola (2013-12-13 22:53:29)
第1，如果你的梳子拔的时候很紧的话，那你在插的时候是什么感觉呢，如果这个时候也很紧的话，那就看下你那台机器有没有调节松劲的旋钮，仔细找下，应该有的。（添付了照片，黑色的就是可以调节松紧的旋钮了）
第2，不知道你的胶是怎么个变形法，如果只是梳子拔后，加样槽旁边的胶条变形的话，你可以拿注射器（带针头，26号大小即可），吸取电泳液去冲洗加样槽的同时，用针头把胶条调整垂直即可。
92573056.snap.jpg
惊醒ing (2013-12-13 22:53:54)
非常感谢，我们的配胶器没有调节的旋钮，就是2边2个绿色的板，夹下就好了梳子插的时候感觉还是挺好插的，胶槽不直的话我拿注射器拨拨的，但是一直要拨也蛮烦的额，呵呵，还有拔的时候那个泳道最下面的胶那部分会跟着梳子一起起来的，我感觉那是严重变形
idoww (2013-12-13 22:54:15)
QUOTE:
插下去不觉得紧一般可以排除梳子不合适这个因素，你确定浓缩胶的配方完全一样？会不会加多了TEMED？下面的胶那部分会跟着梳子一起起来有可能是凝固过快了。misswu61 (2013-12-13 22:54:43)
你用的是什么厂家的电泳槽？
是BIO-RAD的吗？检查梳子和玻板是否配套，有1.0 还有0.75
hustwb (2013-12-13 22:55:04)
我感觉也是你的胶的问题最大
我这里有一个stacking gel的配方，我一直在用，很好！
stacking gel
MiliQ 3.115ml/一个胶
0.5m Tris/HCl buffer(pH 6.8) 1.25ml/一个胶
30% ACR 0.5ml/一个胶
10%APS 0.085ml/一个胶
10%SDS 0.05ml/一个胶
TEMED 2.5ul/一个胶
你可以尝试下：）
惊醒ing (2013-12-13 22:55:25)
谢谢大家，我以前在另外一个校区用的同样的机器一点问题都没有，我用的机器就是BIO-RAD配套的电泳槽，因为电泳槽等配件都是老板国外带回来的好多，在国内配了个BIO-RAD的机器，我觉得可能是梳子和玻板的配套问题了，谢谢了~~
惊醒ing (2013-12-13 22:56:18)
我们一般用的是1.0的，都是配套的，就是不知道原因是什么呢
seagate (2013-12-13 22:56:36)
LZ在拔梳子时可以用两个止血钳插在梳子两个末端。。。然后用两只手均匀的用力把止血钳当作杠杆来拨出梳子
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