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【求助】提包涵体求助，请各位帮忙
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本人用PGEX-6P-1做的GST融合蛋白表达，提包涵体纯化蛋白，提了3次了，每次都是菌体破裂后，收集的沉淀不能溶解，或者只融一小部分，直接导致收集准备做透析的上清内蛋白含量极少，跑胶后发现蛋白确实都集中在沉淀里，而且还很纯。参照分子克隆实验指南配制的试剂，其中溶解液的PH在8.0~9.0之间,蛋白不能溶解让我后面的实验很难做，很苦恼。而我同学用的PET载体却没有这个问题，为什么呢？
破裂菌体后的沉淀用三步洗涤，尿素浓度逐渐递增，我同学洗到最后一步的时候沉淀很少，基本都溶解了，而我的沉淀还有很多，溶解不掉。
是诱导时间的问题（他4小时我5小时）？还是载体质粒的原因，还是表达蛋白本身的原因？谁能帮我找出问题所在，解决问题，让沉淀溶解掉，方便后面做透析，复性和浓缩了？
我看文献别人用6P-1提包涵体也没有这个问题啊，非常郁闷中。。。。急待解决
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最新回复
hyuu (2013-12-15 12:56:39)
你可以用盐酸胍先试一下，然后再解决发酵参数控制的问题。
greenbee (2013-12-15 12:57:02)
BUK (2013-12-15 12:57:22)
你的溶解液的配方是什么？并且你可以尝试将其pH调至10.5左右，溶解效果肯定会好很多！
fox_79 (2013-12-15 12:57:49)
哦，我的蛋白分析后等电点是8.73
fox_79 (2013-12-15 12:58:11)
fox_79 (2013-12-15 12:58:31)
怎么融= = = = = =555，急死我了
njkph (2013-12-15 12:58:45)
盐酸胍试试
fox_79 (2013-12-15 12:59:19)
QUOTE:
实验室只有尿素njkph (2013-12-15 12:59:40)
QUOTE:
我有一个蛋白，也是包涵体，pI大于12，在8M Urea里很难溶的，只溶出很少目的蛋白，无论pH怎么调（4-12）都是这样。后来换用6M GuHCl,溶解是好点，但后面仍很做，复性不易。fox_79 (2013-12-15 13:00:00)
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