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【求助】WB做了无数次了，总是没有结果

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-12-16 16:17    作者: INK    来源: 分析测试百科网

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【求助】WB做了无数次了，总是没有结果

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做了好几个月的WB，总是没有结果，更令人郁闷的是内参始终就没出过。科研中心的老师考虑是蛋白的问题，蛋白是提取的体外培养的细胞，用重新提取的蛋白做，也没有结果。抗体和科研中心的一样，应该不是抗体的问题。配胶的试剂、电泳和转膜液都是自己配的。但是mark 条带是非常清晰的，说明操作过程应该没问题吧。总是找不到原因，头疼啊！
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最新回复

  • yonger (2013-12-16 16:17:30)

    楼主先用丽春红染一下转完的膜，看看条带清晰不？这个不会影响后面实验

  • kuohao17 (2013-12-16 16:17:48)

    同意楼上的，“先用丽春红染一下转完的膜，看看条带清晰不？”，如果丽春红染后有条带，孵后还是不出结果，考虑是上样量不够，加大上样量试试

  • plaa (2013-12-16 16:18:10)


    你要是想确定蛋白有没有问题，可以直接跑完胶就直接考马斯亮蓝染色看胶上面目的蛋白的情况。再就是看电转有没有问题，有时候可能是电转转过了，或是没有转上也能导致WB出不来。

  • wmp1234 (2013-12-16 16:18:32)

    首先你得确认你得膜是没有问题的。那么就只剩下抗体和试剂的原因了，你可以直接用稀释后的二抗加上你的显色底物，排除二抗和底物的原因。再有就是有些二抗和底物在操作过程中膜条是不能干掉的。

  • huifeng0516 (2013-12-16 16:18:55)


    兄弟，我也是啊，不过的内参还是出来了哦
    最近发现自己做不出来的原因，抗体要求的条件不是普通的wb，是非还原条件下的非变性的wb。还是自己不够细心，随了实验室的大流，跟着做了变性的wb。白忙了两个月。
    在此请教非变性的wb，电泳之前的步骤我都知道了。想问下非变性的wb转膜及后面的步骤是否和变性wb是一样的。因为我看到一些资料，非变性的 操作步骤都没有转膜这一步。都是用考染。
    还有一个问题，如果我用非变性条件做，内参能做出来吗。

  • greenbee (2013-12-16 16:19:20)

    你最好能找到阳性对照，来排除你操作的问题

    如果阳性对照的样本做出条带，而你的蛋白未得到，说明是你的样本的原因，如果都未得到，可能就是你的操作中的问题了
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