【求助】请高手帮忙分析一下我的胶

最新回复

• linlinstar (2013-12-16 16:25:18)

  
  1.凝胶有拖尾，原因可能是你的样品中有小颗粒的不溶物，建议你用0.22的滤膜过滤下。或者是你的凝胶凝结的时候不好出现气泡，不过现在这个季节基本不大可能
  2.上样量过多
  我只能分析这两点，别的还请高人继续分析

• ROSE李 (2013-12-16 16:27:03)

  
  现在讨论这项技术的基本很少了。
  1、上样量肯定是大了，我一般13cm的胶条上样量为200ug左右，不知道你的多少？
  2、样品上样前怎么没有纯化步骤？脂质，核酸等等杂质是否保证除去？我一般使用clean-up试剂盒处理过再上样。
  3、IEF过程怎么没有一个低压除盐的过程？
  总的感觉就是样品很脏，不干净。

• u234 (2013-12-16 16:27:27)

  
  1.上样量对于银染太多了,一般银染50ug足够了.
  2.上样前的样品必须经过高速离心,如20000rpm,15min(对于培养细胞不推荐clean-up,clean-up丢失蛋白严重,剩下的以水溶性蛋白为主,其唯一好处就是做出的2-DE图谱漂亮-----水溶性蛋白本身一般都不拖尾,不过对于细菌或植物样品的话,可以使用clean-up来除去糖类纤维成分);

• chengjie79 (2013-12-16 16:30:52)

  
  感谢各位高手的指点
  我的样品只是用丙酮沉淀过，确实没有进行其它的步骤来纯化
  我再用试剂盒纯化一下看看
  只是还有一点疑问，就是小分子量蛋白似乎分得不太好，挺密集的
  不知道需不需要提高SDS-PAGE胶的浓度？我现在用的是12%的胶

• flower-201 (2013-12-16 16:33:43)

  可以试试用10－15％的梯度胶

• jujuba (2013-12-16 16:34:02)

  
  何为10－15％的梯度胶 ,怎么做啊

• fox_79 (2013-12-16 16:34:27)

  
  【1.上样量对于银染太多了,一般银染50ug足够了.
  2.上样前的样品必须经过高速离心,如20000rpm,15min(对于培养细胞不推荐clean-up,clean-up丢失蛋白严重,剩下的以水溶性蛋白为主,其唯一好处就是做出的2-DE图谱漂亮-----水溶性蛋白本身一般都不拖尾,不过对于细菌或植物样品的话,可以使用clean-up来除去糖类纤维成分);
  
  请问结肠组织（全层的）经clean-up处理是否合适？谢！

• orangecake (2013-12-16 16:34:45)

  
  我感觉第一向等电聚焦不充分。

• loli (2013-12-16 16:35:05)

  
  同意楼上几位的说法：
  1、上样量过大，所以导致的你的图谱左半部分，高表达量的蛋白过浓
  2、丙酮沉淀对色素去除效果最好，改用clean up kit试一下
  3、横纵纹过多，clean 和 减小上样量以后应该会有极大改善、
  4、你说胶条聚焦完毕后有增厚现象，实际上胶条聚焦完成完全溶胀以后应该整体都有增厚现象，不然就不正常了
  5、你的样品碱性蛋白损失比较严重

• minran_1980 (2013-12-16 16:35:38)

  
  我的图片和这位有着天然的相似

  
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• pengke1983 (2013-12-16 16:35:59)

  
  各位这是我最近做的一个2D电泳图，不知道为什么下端低分子区总是会出现拖尾的现象，请各位兄台帮忙分析一下，谢谢

  
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