【求助】EMSA

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-12-16 22:17 作者: 3648755 来源: 分析测试百科网

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【求助】EMSA

最近做EMSA,遇到如下问题：
1、为什么与DNA结合的条带和未结合的条带分不开
我的实验条件是预电泳90V，10MIN,电泳110V，60min，空白孔中加的蓝色上样缓冲液已跑到胶的底部
2、空白组条带为何比加蛋白的样品中未与DNA结合的窄
空白组为不加蛋白的对照，蛋白上样量是20ug
3、我做的条带究竟是特异性的还是非特异性的

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最新回复

yyaxw84 (2013-12-16 22:18:26)

您好！请问您是用的什么盒子做的呢？我打算用PIERCE做，马上开始了，到时大家研究一下吧！
+小生怕怕+ (2013-12-16 22:18:48)

这那里是分不开啊，这就是自由探针，没有阳性带啊！预电泳都在30min以上；电泳的电压有点低；正常我们上样也就是5ug左右，没用过20ug那么高的，做结合反应不是越高越好！！！你这个做的是那个转录因子？
wawa (2013-12-16 22:19:16)

pierce的，我上次用的，pierce的咋不好使，贼贵，一个kit都做完了还没拿到什么结果，郁闷死了
雪花子 (2013-12-16 22:20:00)

各位有谁知道Loading Buffer配方的，分享一下！感谢！
taoshengyijiu (2013-12-16 22:20:17)

查一些EMSA的原始文献
taoshengyijiu (2013-12-16 22:20:38)

QUOTE:
原帖由 wawa 于 2013-12-16 22:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

pierce的，我上次用的，pierce的咋不好使，贼贵，一个kit都做完了还没拿到什么结果，郁闷死了
是不是核蛋白没有提取出来？
探针work吗？
lixi559 (2013-12-16 22:21:18)

你们用的什么标记的，放射性标记，还是生物素标记的，自己标的吗
wawa (2013-12-16 22:21:40)

不是啊，蛋白肯定提出来了，细胞数也够用，都是用pierce的，一整套，做的挺郁闷的，最后还是没办法，换了别的kit了，还在坛子里面找了上面那位精帖的EMSA高手咨询了好多才总算是出了结果，这实验花了不少银子的。