【求助】双向电泳总是跑不好，帮忙看看我的图

最新回复

• youreyes (2013-12-20 10:55:37)

  
  还有一张图，新手，大家包涵啊！

  
  30926527.jpg

• 66小飞侠 (2013-12-20 10:56:27)

  
  条件写清楚点啊。。
  就一张图没啥好说的。。。 的确不怎么好
  没其他条件没法给建议

• PINK (2013-12-20 10:57:28)

  
  这是7cm的胶条么......聚焦不良,而且有核酸污染

• is2011 (2013-12-20 10:58:59)

  
  上面是18cm的胶，TCA/丙酮法，裂解液尿素8M 硫脲2M CHAPS 4% DTT 60 mM
  PMSF 0.5mM，聚焦过程都很顺利

• is2011 (2013-12-20 11:00:43)

  若加核酸酶可以去除核酸吗？一般用量是多少

• 2541 (2013-12-20 11:02:52)

  LZ18CM的胶条 点的数量还是这么少的话 按TCA/丙酮法明显是样品制备有大问题。
  裂解液的配方实际上都差不多的
  LZ的问题还是在样品制备
  另外核酸酶可用可不用
  大多数时候我都没用过。

• pengke1983 (2013-12-20 11:03:20)

  如果说是TCA/丙酮法沉淀蛋白,核酸酶基本可以不用.你的上样量是多少啊

• youreyes (2013-12-20 11:04:39)

  
  上样量6mg/ml，我重复做了5次。每次基本上都有重复提蛋白，但是每次都是出的横竖条纹，基本都上边的图的样子，基本上没点。
  谢谢大家的帮助！！！！

• wmp1234 (2013-12-20 11:07:49)

  
  上样量6mg/ml,１８cm胶条如果我没弄错的话上３５０ul到４００ul，就是你一张图上上了至少２mg蛋白，推荐上样量应该是１mg吧，这么大的上样量会不出现横纹么？

• gogo (2013-12-20 11:10:37)

  
  18cm的胶，上样量基本上就是大于〉5mg/ml，340ul，是不是上样量过大？我最害怕真的是蛋白提取铀问题，那样，我提了3、4次就没一次能提好的，难道核酸污染很严重？我每次离心都是14000转，40分，还离心不干净。黏度很高，是不是真的核酸污染？？？？

• wmp1234 (2013-12-20 11:12:33)

  QUOTE:

  原帖由 gogo 于 2013-12-20 11:10 发表
  
  18cm的胶，上样量基本上就是大于〉5mg/ml，340ul，是不是上样量过大？我最害怕真的是蛋白提取铀问题，那样，我提了3、4次就没一次能提好的，难道核酸污染很严重？我每次离心都是14000转，40分，还离心不干净。黏度很高，是不是真的核酸污 ...

  总上样量应该是1mg,你自己算下吧,大了不少.14000转换算成离心力是多少g?可能不止核酸还有别的污染
  

• standbyme (2013-12-20 11:12:56)

  看上去还是样品杂志污染很严重，超声一下去核酸试试吧