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【分享】染色体制备中的关键步骤
1. 秋水仙素是防垂体抑制剂.一般最终浓度每瓶0.07Lg,作用时间2.5~3h,一般秋水仙素溶液的浓度与处理时间有一定的关系.如果秋水仙素的浓度过高或处理的时间过长,结果标本中的分裂细胞虽多,但染色体过于浓缩,以致细胞形态特征模糊,难以进行分析.相反,如果秋水仙素的浓度过低或处理的时间过短,则标本中的分裂细胞就少.【分享】染色体制备中的关键步骤
2. 0.075mol/LKCl溶液用于处理中期细胞,使细胞核膨胀破裂,染色体分散良好而便于观察计数,0.075mol/LKCl溶液做低渗液,当低渗处理时间过长时,细胞膜往往过早破裂,导致分裂细胞丢失,或染色体丢失;如果低渗处理时间不足时细胞膨胀不够,则染色体分散不佳,难以进行染色体计数分析.低渗时间最好30~50min,经过低渗处理的细胞因已膨胀,容易过早破裂,造成分裂细胞丢失,所以低渗后操作应特别注意不要用力冲吸.
3. 如果固定液不新鲜或甲醇!冰醋酸的质量不佳时,染色体形象模糊染色体周围有胞浆背景.所以固定液应现用现配,为分析纯的甲醇和冰醋酸按3:1的比例配制.
4. 如果冰片冷冻不够,细胞难以贴附而造成丢失.载玻片经过一系列处理擦干后,放置冰箱内,冰冻4小时以上,既即为冰片.滴片时现用现拿出,否则会融化.
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最新回复
龙小好汉 (2013-12-20 13:23:29)
近期也在做染色体,75mM KCl低渗,偶的效果很不好。分裂相不多,看片子时看到的都是没摔破的细胞。
楼主说载玻片经过一系列处理后放入冰箱冷冻4小时以上。能详细说下怎么处理的吗?
zbboom (2013-12-20 13:24:22)
shangyi (2013-12-20 13:25:48)
尘朵朵 (2013-12-20 13:27:05)
为什么要过酒精灯呢?
yayya (2013-12-20 13:27:44)
玻片主要是要防止上面有油,如果有油,嘀片的时候染色体分散会不好,所以玻片要先加洗洁剂100度煮30min,然后用纱布一张一张的擦,直到上面没有油为止,(虽然繁琐,但是为了得到好的染色体也没有办法了)然后清水冲洗干净,然后泡酸。使用时在取出用蒸馏水冲洗干净,置于干净的蒸馏水中,4度放置4小时左右,然后使用。
嘀片的时候一般嘀3-5嘀就可以了,不能太多,多了就会流出去,染色体就没有了,一般不用吹,让它自己散开,然后酒精灯上来回2-3次就可以了。然后烤片,准备分带。(注意:嘀片的时候不能太高了,要是那样,染色体都打飞了,而且会很分散,计数的时候会不好计数。一般1-3cm就可以了,如果是羊水还有更低)
个人经验,仅供参考。
yayya (2013-12-20 13:28:13)
zhy平平 (2013-12-20 13:29:05)
yayya (2013-12-20 13:31:28)
下图外周血培养72小时后制片G显带,大家多多指教!
49465349.jpg
yayya (2013-12-20 13:32:25)
20732603.jpg
yayya (2013-12-20 13:33:12)
(47,XY,+21)
32422260.jpg
njkph (2013-12-20 13:36:29)
yayya (2013-12-20 13:37:22)
雎鸠05 (2013-12-20 13:40:31)
雎鸠05 (2013-12-20 13:41:46)
yayya (2013-12-20 13:42:17)
eve_49 (2013-12-20 13:43:37)
eve_49 (2013-12-20 13:44:48)
dutao377@126.com
wzqzy (2013-12-20 13:45:35)
2.我发现各地大体操作步骤虽一致,但具体操作却大相径庭啊。我们最近又出现一有趣的问题:在胰酶37度水浴稳定后下片,试片16秒还不算过的片,成批下15秒也过,再下11秒还偏过,再下5秒还能得到漂亮 的带纹,有高手能解释吗?
wzqzy (2013-12-20 13:45:58)
yayya (2013-12-20 13:46:20)
你所说的是不是胰酶浓度太高了。胰酶浓度不能太高。
羊水细胞和绒毛细胞培养和制作染色体的具体步骤我还没有电子版的,等我有空写好了在发给大家一起分享!
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