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• gogo (2013-12-20 16:17:16)

  QUOTE:

  原帖由 11_hjx 于 2013-12-20 16:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我做转基因原核表达，测序正确，一个反应就测完了，但是表达出来的蛋白比预测的大了3-4kd.不知道怎么会出现这种情况啊？？？ 而且我的蛋白是前端融合his标签表达的，wb做了有条带。 分子marker 从上而下是 94kd, 60kd, 45kd, 27kd ...

  不会是可变剪切吧？

• dmg (2013-12-20 16:17:40)

  
  histag重组蛋白在做SDS-PAGE时，其表观分子量有时候偏大，这与带正电荷的histag在电场中的反向作用力有关，不一定是构建的序列不正确。
  版内讨论过此类问题，有一篇文献还专门讲过这个问题，请搜索一下吧。

• NBA (2013-12-20 16:18:10)

  
  3-4 kD out of 24 kD is fully acceptable.

• ero11 (2013-12-20 16:21:19)

  
  从6HIS到你设计的酶切位点之间的序列你算进去了吗？

• 阿司匹林 (2013-12-20 16:22:20)

  
  同意4楼，SDS-PAGE本来就不准，你从氨基酸序列推出来的分子量也不准，所以这个误差应该是可以接受的。
  如果有目的蛋白的纯品做阳性对照会更容易分析。

• hold住 (2013-12-20 16:22:42)

  
  只差3-4KD很有可能就是对的了，有的marker会不很准确，而且根据marker估算目的条带也会有误差，所以你可以接着往下做一下看看功能怎样了

• one (2013-12-20 16:23:09)

  楼上的是正解，本人做his－tag蛋白时也经常遇到同样的情况。若想确定就做一个目的蛋白抗体的western－blot，用空载体菌株的总蛋白做阴性对照。

• zsxan1990 (2013-12-20 16:36:26)

  
  你是不是根据marker目测分子量，这样肯定会有误差的，再说Marker的个个条带在不同浓度的胶上的迁移速度是不同的，不能按距离等分。Good Luck！

• 98776langtao (2013-12-20 16:37:15)

  大几KD是正常的，可以做一下WB,鉴定是不是你要的蛋白质！