【求助】离子交换柱应该装多高？

最新回复

• seagate (2013-12-20 23:28:04)

  不是不能，而是理论上不合理。
  短粗柱在相同的载量、相同流速下，比细长柱的压力降更小。换句话说，短粗柱可以节约宝贵的生产时间。
  如果，你只是小规模的试验室使用，纯化点蛋白做文章，或者制备一点抗原、抗体用，则在柱子方面没有什么限制的。尽管用好了。只是放大生产要考虑这一点。
  实际上，在试验室你最常用的小柱就是16/20, 26/20, 35/30之类的柱子。

• BOSS2011 (2013-12-20 23:28:26)

  
  装高了还有个分子筛效应的问题。
  以Sepharose FF 系列树脂来说，它的颗粒内也是中空有微孔的，这样增加了接触面积能有更大的吸附量。同时这也会显出分子筛效应。装的太高可能就会和你小试的峰形不同。
  依情况而论，有时候这样会带来一些好处，试过了才知道。
  祝顺

• lorri (2013-12-20 23:28:44)

  
  离子交换柱不必太长，size exclusive柱才需要长度来得到分辨率。离子柱最关键的是binding buffer的pH和离子强度。 特别是大的制备柱，有的是2米多宽的直径，只有半米高。
  分析柱由于考虑了移动相的离子强度梯度，所以要有一定的长度得到分辨率。 一般分析柱如mono-Q，长度不很少超过10cm。很多是1-5 cm。 离子交换柱太长反而不好。不如花工夫根据蛋白的等电点设计你的binding buffer pH，和移动相的离子强度梯度。 有FPLC的话可用线性离子梯度，采用人工重力，可用stepwise离子梯度。

• 喵咪 (2013-12-20 23:29:10)

  QUOTE:

  原帖由 lorri 于 2013-12-20 23:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  离子交换柱不必太长，size exclusive柱才需要长度来得到分辨率。离子柱最关键的是binding buffer的pH和离子强度。 特别是大的制备柱，有的是2米多宽的直径，只有半米高。
  分析柱由于考虑了移动相的离子强度梯度，所以要有一 ...

  我想请问一下缓冲液PH和蛋白质pI相差越多越好，还是有一个范围？

• lorri (2013-12-20 23:29:31)

  
  与楼上探讨。
  Buffer的pH一般与目标蛋白的PI相差2个pH值左右就可。具体得看你分离的对象和目的，从什么样的原材料中分离，用什么样的填料（阴或阳离子交换），在实际实验中去摸各种条件才知道。
  严格的说，蛋白分离不仅是分离问题，最关键的是如何建立快速追踪你的目标蛋白的方法。只要有快速简便的方法知道你的目标蛋白在哪一个层析组份中出现，你才可能一天同时可以探索多种填料，测试不同的buffer条件去优化建立或标准化你自己的分离提纯方法
  所以说，蛋白质分离提纯工作，不仅是化学的层面问题，需要综合的知识与长期的经验积累。

• 喵咪 (2013-12-20 23:30:03)

  QUOTE:

  原帖由 lorri 于 2013-12-20 23:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  与楼上探讨。
  Buffer的pH一般与目标蛋白的PI相差2个pH值左右就可。具体得看你分离的对象和目的，从什么样的原材料中分离，用什么样的填料（阴或阳离子交换），在实际实验中去摸各种条件才知道。
  严格的说，蛋白分离不仅是分离问 ...

  我的蛋白pI4.82，我想用0.01M 7.4的PBS缓冲液上DEAE，但是上DEAE是不是不能用PBS缓冲液啊

• wiwi (2013-12-20 23:30:19)

  
  谢谢大家的指教，学到了很多东西。
  我是想从小试转到中试，胶的填装量也就决定它的处理量，如果我的柱子一定，流速，buffer等不变，不能更换，15cm的处理量、处理效果是不是比10cm有点优势？

• wiwi (2013-12-20 23:30:53)

  QUOTE:

  原帖由 喵咪 于 2013-12-20 23:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  我想请问一下缓冲液PH和蛋白质pI相差越多越好，还是有一个范围？

  分析柱考虑了移动相的离子强度梯度----是不是说柱子太长，不能迅速达到我希望的离子（电导）值，洗脱下的蛋白跟小试时就有了区别，小则浓度降低，大则洗脱下了本可避免的杂蛋白。

• lorri (2013-12-20 23:31:14)

  分析柱考虑了移动相的离子强度梯度----是不是说柱子太长，不能迅速达到我希望的离子（电导）值，洗脱下的蛋白跟小试时就有了区别，小则浓度降低，大则洗脱下了本可避免的杂蛋白。

• lorri (2013-12-20 23:31:35)

  
  离子交换柱不象c18等分配层析柱，达到脱落的离子强度在下一段柱子中不再参与binding，所以长度不会增加理论梯级数而增加分辨率。C-18反向柱改变移动相的极性梯度改变了，分析物依然参与在两相的分布，仅是分析物在两相中的分配系数，所以c-18分析柱长度与理论梯级数是成正比的，与分辨率有关。