【求助】膜蛋白 SDS-PAGE 无目的条带

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-12-21 09:45 作者: ii077345 来源: 分析测试百科网

我的目的蛋白是跨膜蛋白，分子量分别为45（左）和50kd（右），用游离型质粒转化酵母后，我想提取总蛋白，进行SDS-PAGE。但是折腾了好久了，与空质粒对照相比，含外源基因的转化子始终没有特异性条带，marker右一为空质粒对照，请各位帮助我分析一下可能的原因，提出改进的意见。不胜感激！

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ii077345 (2013-12-21 09:48:32)

如图，marker右一为空质粒对照
wood533 (2013-12-21 09:49:26)

膜蛋白经过全细胞电泳是很难看出条带的，一般都是通过测定活性确定已经表达，如果非要看条带的话，可以经过超速离心提取膜蛋白后再跑电泳，这样比较明显。
u234 (2013-12-21 09:52:31)

应该做Western Blot确定，SDS-PAGE除非表达量很高或者杂蛋白很少，否则很难看出目的蛋白的表达
ii077345 (2013-12-21 09:52:49)

酵母的游离质粒，没有his标签，没有抗体啊。
这下麻烦了，在现有基础上就没有别的方法了么。
okhaha (2013-12-21 09:53:52)

QUOTE:
原帖由 ii077345 于 2013-12-21 09:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
酵母的游离质粒，没有his标签，没有抗体啊。
这下麻烦了，在现有基础上就没有别的方法了么。
如果想发好的文章，最后一定需要有特异性的抗体进行确证，因此WB是必然的，想想办法找抗体吧
如果有条件，就AKATA把目的蛋白分出来，自己去做抗体好了。。。不过时间就长了。。。
祝好运！
kuohao17 (2013-12-21 09:55:01)

也就是说即使是过表达了的膜蛋白，细胞超声裂解后，不做超速离心，用全蛋白跑SDS-PAGE也是看不到特异条带的？