【求助】蛋白复性

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-12-23 14:42 作者: hustwb 来源: 分析测试百科网

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【求助】蛋白复性

我正在做一个蛋白的原核表达，形成包涵体盐酸胍溶解纯化后，进行SDS-PAGE检测条带很亮，是目的蛋白，浓度约为1.6mg/ml，稀释3倍后进行透析复性，程序为：6M尿素、4M尿素、2M尿素、0M尿素（pH均为8.0），最后用PBS透析4次（每步6小时以上），以上透析均是在慢速磁力搅拌下冰浴中进行的。
问题是：当更换为PBS后，透析袋内逐渐增加絮状物！请问各位有经验的人士，这是不是意味着出现了蛋白聚集体，有无改善的方法？这些絮状物不能直接进行免疫动物吧？

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最新回复

guagua (2013-12-23 14:43:13)

含尿素蛋白样品免疫动物做多抗没关系的。
可以采用稀释复性的方法，pH调节高一点，如pH8-10，形成沉淀的可能会减少。
hustwb (2013-12-23 14:48:06)

刚纯化出来的蛋白溶液的尿素为8M，可以直接免疫兔子吗？
guagua (2013-12-23 14:48:45)

QUOTE:
原帖由 hustwb 于 2013-12-23 14:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

刚纯化出来的蛋白溶液的尿素为8M，可以直接免疫兔子吗？
可以，没问题。
INK (2013-12-23 14:49:15)

应该不可以哦，之前有人用含2M尿素的蛋白免疫动物，小鼠会出现伤口溃烂的情况，8M尿素是高盐，高渗吸水，破坏周边组织，肯定不可以
guagua (2013-12-23 14:49:40)

QUOTE:
原帖由 INK 于 2013-12-23 14:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

应该不可以哦，之前有人用含2M尿素的蛋白免疫动物，小鼠会出现伤口溃烂的情况，8M尿素是高盐，高渗吸水，破坏周边组织，肯定不可以
谁让你往动物身体里面打高浓度尿素啦！是让你打包涵体悬浊缓冲液……
免疫动物只需要一级结构就可以了，一般不要求蛋白有活性。
hustwb (2013-12-23 14:50:03)

啊，我打了啊，用的是纯化后的蛋白尿素溶液!
下次加强免疫的时候看看是否有溃疡？不过还是感谢各位的提醒哦！
INK (2013-12-23 14:50:27)

去搞点生理盐水这种等渗的东东做混悬液，注射动物的时候还能造成的痛苦小点，比较人道一点吧！动物挣扎也比较小，实验人员相对挨咬的机会也比较少。
hustwb (2013-12-23 14:50:50)

加强免疫时未发现有发炎溃烂的现象，希望有良好的免疫效果。。。