【求助】为什么我的蛋白总提不出来呢？

最新回复

• kuohao17 (2013-12-23 15:39:50)

  
  你在裂解时不震动混匀吗？我们提蛋白时在冰上裂解，每5-10分钟在振荡器上混匀一次，大概30分钟左右就可以了。

• qqshepherd (2013-12-23 15:40:08)

  
  谢谢！我的是混匀的，现在我知道了，我研磨的组织太多了，裂解时间太长，裂解不完全并且降解了，今天改进了，下午就可以看到结果了。

• 梦幻苹果 (2013-12-23 15:40:35)

  楼主， 你也是提取肾脏组织的核蛋白吗？我的实验也是。我之前都也是用RIPA裂解液来提蛋白，但似乎都不理想，每次跑完电泳 考马斯亮蓝染色结束后 目的蛋白的条带非常淡 几乎看不见。准备尝试着用组织核蛋白提取方法尝试提取 细胞核的总蛋白 再进行电泳 看看目的蛋白的范围条带是否会浓一些。。。希望多多交流。。。

• qqshepherd (2013-12-23 15:40:59)

  是啊！给你的一样，我也是肾脏核蛋白， 总提不出来，我的目的蛋白根本提不出来的！只有两条大的蛋白条带！我在网上查的信息说RIPA裂解液可以提取核蛋白的！下面的网址有具体信息！还有专门提取核蛋白的步骤及试剂配制！cuturl('http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11379#A4')祝你试验顺利！我的蛋白是PCNA，36KD的，你的呢？

• 梦幻苹果 (2013-12-23 15:41:22)

  我也买了RIPA P0013B 裂解液 看它的说明书 说裂解核蛋白的能力很强，但不是专门用来裂解核蛋白的，我的目的蛋白是 HIF-1a，120KD，很容易降解，不好做。。。

• qqshepherd (2013-12-23 15:41:40)

  
  今天总算找到原因了，其实我的蛋白提出来了，考马斯亮蓝染色后脱色不充分，钱天做的今天才看到条带，准备转膜看看！谢谢大家的关心
  ！

• dog002 (2013-12-23 15:42:01)

  
  大家好：我做的是磷酸化NF-KBp65，需要提取总蛋白，胞浆加胞核的，我买RIPA P0013B 裂解液怎么样啊？还是直接买细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒啊。盒子太贵了，四百多，自己配吧，我一个人用的比较少也不划算。请各位高手指点指点！

• uaubc (2013-12-23 15:42:26)

  我提的是肾脏组织蛋白总蛋白，目的蛋白为核蛋白PCNA，用的是国产的PIRA裂解液，去污剂为PMSF,具体步骤为：
  取少量组织，液氮研磨，加100UL （PIRA：PMSF=9：1），四度冰箱裂解1小时，12000rpm 4摄氏度 离心10分钟，加2X上样Buffer ，沸水煮5分钟，SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝染色，脱色，但只在分离胶与浓缩胶交界处看到两条蛋白条带？请高手分析一下原因？谢谢！
  
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  用胞浆、胞核蛋白抽提试剂

• uaubc (2013-12-23 15:42:42)

  大家好：我做的是磷酸化NF-KBp65，需要提取总蛋白，胞浆加胞核的，我买RIPA P0013B 裂解液怎么样啊？还是直接买细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒啊。盒子太贵了，四百多，自己配吧，我一个人用的比较少也不划算。请各位高手指点指点！
  
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  当然买一个算了
  自己配制每种试剂一买就是400的好几倍了
  这个蛋白可以提取总蛋白做

• uaubc (2013-12-23 15:43:03)

  
  但是我的组织冻在-80°冰箱里，说明书上说对冻存组织效果差，怎么办啊?还能用吗？