【求助】2DE gel 考染固定时间需要几个小时？

最新回复

• 2541 (2013-12-23 17:52:27)

  45min,也可以染色过夜，固定不会增加灵敏度
  固定太长时间有可能会使蛋白质产生乙酰化修饰

• 小荷尖尖 (2013-12-23 17:52:48)

  
  为什么是乙酰化修饰？还有可能产生别的什么修饰吗？

• applebook=213 (2013-12-23 17:53:07)

  一般是30min-1h，也可以过夜

• 尘朵朵 (2013-12-23 17:53:27)

  
  考染不需要另外固定的，染色液中本就含有固定液成分，漂洗后直接染就是啦！！

• 101010 (2013-12-23 17:53:49)

  QUOTE:

  原帖由 尘朵朵 于 2013-12-23 17:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  考染不需要另外固定的，染色液中本就含有固定液成分，漂洗后直接染就是啦！！

  
  考染分R-250和G-250两种，我们跑胶考染的时候G-250是固定的，脱色的时候直接用ddH2O脱色；而R-250没有要固定，但是用转配的脱色液脱色。考染染色过夜对检测的灵敏度是没有关系。
  应该是这样的吧！

• 小荷尖尖 (2013-12-23 17:54:14)

  恩，我用的是G-250, 现在甲醇和醋酸加水（240：60：300mL）固定一小时，以前过夜固定太浪费时间了。

• glass (2013-12-23 17:54:38)

  
  对于考染的蛋白固定，不同的人有不同的看法，我也知道有人不用固定，效果也不错的，但是我自己是固定的，另外，我个人感觉既然书上说考染需要固定，那最好还是固定一下比较好，我觉得还是有一些内在道理的，而且固定也很简单，不怕一万，只怕万一，呵呵！

• yayya (2013-12-23 17:55:15)

  恩，我用的是G-250, 现在甲醇和醋酸加水（240：60：300mL）固定一小时，以前过夜固定太浪费时间了。
  
  ===========================================================================================================
  
  不是说固定时间一般是30~60min 就可以了啊？而且固定的时间太长了的话会对胶内的蛋白质产生修饰。也就是说固定时间太长不好！！！
  但是我有时候固定的时候忘记时间了，不过没有固定过夜的。
  不知道故帝国过夜到底会不会有影响？影响大不大？？

• 小荷尖尖 (2013-12-23 17:55:34)

  
  不知道有没有人注意到GE的IPG buffer,pH 3-10 and pH 3-10 NL说明书附有一张卡片，Improved IPG buffer......写的有点广告嫌疑，
  序列号：28-9518-94 AA， 上面有一个note：
  please note that the new buffer recipe will give rise to a higher backgroud in basic pH area when using silver or coomassie staining. the higher backgroud can be avoided by prolonging the fixation time to 3h, or up to overnight if needed.
  所以说可能过夜固定也没什么，但是我的胶碱性区本来就没多少点，所以也无所谓了。
  我的经验是，固定一个小时跟过夜，单从2-D map上看没啥子区别，过夜好像会使胶发胀一些。
  但是既然有人说会使蛋白产生修饰，就不知道是什么原理了？

• finger (2013-12-23 17:56:00)

  
  不用固定或者固定一小时都没问题,时间长了也不会增加灵敏度,还有可能使蛋白质产生乙酰化,即将有机化合物分子中的氮、氧、碳原子上引入蛋白的乙酰基CH3CO-.