【求助】Western测整合素integrin

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-12-23 21:39 作者: xue258 来源: 分析测试百科网

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请教用Western blot测细胞膜上的整合素，是提取膜蛋白、胞浆蛋白还是总蛋白？

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最新回复

huifeng0516 (2013-12-23 21:39:51)

做过integrin beta-1，大鼠骨骼肌，提取总蛋白
效果不是很好
可能与抗体有关
可以先提取总蛋白做预实验
当然也有提取膜蛋白的盒子，Pierce
抗体你用哪家的？
xue258 (2013-12-23 21:40:52)

我还没买，准备用santa cruze的sc8978,不知道怎么样，你用的是哪个公司的？哪个公司的比较好呢？
huifeng0516 (2013-12-23 21:41:21)

你可以试试Epitomics的抗体
最近用了一些整体效果很不错
xue258 (2013-12-23 21:41:42)

QUOTE:
原帖由 huifeng0516 于 2013-12-23 21:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

你可以试试Epitomics的抗体
最近用了一些整体效果很不错

也是提取总蛋白做的吗？我查了一下，好像只有一种这个货号P05556的，但我以后也要做IP、细胞免疫荧光，那得重新买了吧，这个公司好像没有，你买的哪种，做什么的？谢谢。
xue258 (2013-12-23 21:46:24)

还想再问一下，一般这种整合素β1抗体，它能结合β1下面所有的亚型吗？
huifeng0516 (2013-12-23 21:47:22)

我原来做的时候用的是santa的抗体
但是结果一般吧
建议多参考文献来确定
ii077345 (2013-12-23 21:47:42)

如果表达量大的话，用总蛋白完全能做出来
xue258 (2013-12-23 21:48:16)

提总蛋白的时候是不是最好用也能提取膜蛋白的裂解液，尽可能把膜蛋白提取下来,我们实验室提取总蛋白用的lysis buffer的配方是：1%NP40 2ml，0.5MEDTA 0.4ml,0.5M Hepes 20ml, 5M NaCL 10mL,0.1PMSF 2ml，Aprotinin等蛋白酶抑制剂，不知道这个配方对膜蛋白的提取怎样？
xue258 (2013-12-23 21:53:03)

上面的配方好像写的不太清楚，我们最终浓度是1% NP40，NaCl 250nm，Hepes 50nm，EDTA 1mM
再加蛋白酶抑制剂。
october7 (2013-12-23 21:53:21)

可以，只要特异识别β1亚基就行！