【求助】NICD做不出来，求助~~

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-12-23 22:36 作者: 30moonriver 来源: 分析测试百科网

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【求助】NICD做不出来，求助~~

这个蛋白做了很久，一直出不来。一抗的浓度提高到了1：250，依然没有结果。切胶选取的范围是72~170KD.居然没有结果，不知道怎么办。有做过的高手么？指导一下，感激不尽。
抗体的信息见PDF,是CELL SIGNALLING的抗体。

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30moonriver (2013-12-23 22:36:22)

如图：

15239986.snap.jpg
yyaxw84 (2013-12-23 22:36:54)

我们做，用的是Santa的，NO。6014，notch胞内段，可以做出来的
yyaxw84 (2013-12-23 22:37:15)

胶的浓度，转膜时间，用的什么细胞，一抗，二抗浓度
30moonriver (2013-12-23 22:37:49)

QUOTE:
原帖由 yyaxw84 于 2013-12-23 22:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

胶的浓度，转膜时间，用的什么细胞，一抗，二抗浓度
1.10%分离胶+5%浓缩胶，90 V跑到底
2.转膜：300mA 2h(因一起还有个150KD的蛋白，所以转膜时间长了点。)
3.一抗；1：200
二抗：1：2500（santa cruz, sc2004）
请问你用的蛋白是核蛋白还是总蛋白啊？可能这个蛋白的表达量不够，我用的总蛋白做不出来。谢谢~~
30moonriver (2013-12-23 22:38:33)

QUOTE:
原帖由 yyaxw84 于 2013-12-23 22:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

我们做，用的是Santa的，NO。6014，notch胞内段，可以做出来的
看了下，你那个sc-6014是做NOTCH全长的，300kd.
我要做的是NICD,110kd的。
30moonriver (2013-12-23 22:38:50)

没人知道么？算了，提高上样量试试看。
30moonriver (2013-12-23 22:39:07)

提高上样量，提高一抗浓度，出来了。
可能是表达量太低了。
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自己动脑，丰衣足食！~~
kewanqi2011 (2013-12-23 22:39:29)

sc6014检测的是抗原表位是胞内段，也可以检测nicd
ii077345 (2013-12-23 22:39:57)

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乳腺癌
请教楼主,我也在做notch1,也是santa的一抗，现在用乳腺癌组织摸索条件，但一直无条带。请问您用的什么条件！
kewanqi2011 (2013-12-23 22:40:24)

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乳腺癌
首先要说的是santa的抗体比较烂，好多都是国内生产的贴的SANTA的标签，当做进口的卖。实在做不出来可以投诉让公司换：），我所知道的是北京一研究生3年读完了，一分钱没花。首先确定乳腺癌组织表达不？量高不高，我用的一抗稀释度是1：1000，90V电压电泳半小时后换120V，90min，转膜85V，2小时，注意降温，二抗是Sigma 1：5000，常温1小时，很好出
ilovegaga (2013-12-23 22:41:00)

请问，你用的是什么样品？