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【求助】cleaved-caspase-3的western-blot检测

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-12-25 14:37    作者: 89tongzijun    来源: 分析测试百科网

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【求助】cleaved-caspase-3的western-blot检测

我现在在做cleaved-caspase-3的western-blot检测，用的是10%的胶，一抗用的是Cell Signaling technology公司的，浓度为1：500，二抗用的是中衫的，浓度为1：2000，可是我做了四次了都是白板，请大家帮帮忙啊！
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  • pengke1983 (2013-12-25 14:40:04)

    多大的膜啊？电转时间多少？如果这些都没问题，那就考虑你的实验设计了。。

  • 89tongzijun (2013-12-25 14:41:34)

    QUOTE:

    原帖由 pengke1983 于 2013-12-25 14:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    多大的膜啊？电转时间多少？如果这些都没问题，那就考虑你的实验设计了。。
    膜是0.45um,电转时间是120min,昨天我把胶的浓度提到了15%，还是不行，快郁闷死啊！

  • 兔唇 (2013-12-25 14:42:02)


    。。。。。
    你确定有剪切的caspase3？你的抗体检测的是所有的cas3还是只识别剪切的？如果是总的，你可以一起检验，如果总的能杂出来而剪切的杂不出来，那是你的体系根本没有发生凋亡，别老追着WB体系的责任

  • DONT (2013-12-25 14:44:39)


    做一下你的loading control，是不是有结果？然后再具体考虑！

  • deducte (2013-12-25 14:46:26)


    我也在做，呵呵。同感。但现在做出来了。用的是NC膜，12%胶100V1H转的。17和19的条带应该是都有的

  • 89tongzijun (2013-12-25 14:48:36)

    QUOTE:

    原帖由 deducte 于 2013-12-25 14:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    我也在做，呵呵。同感。但现在做出来了。用的是NC膜，12%胶100V1H转的。17和19的条带应该是都有的
    太好了，我最近几天没做，我想问一下你的一抗和二抗分别是哪个公司的，用的多大的浓度，NC膜是多大的，我是新手，帮帮忙啊，******
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