【求助】9kDa的小蛋白

最新回复

• utt0989 (2013-12-26 15:47:13)

  
  可以做WB，问题是分子量太小，电泳不好跑。
  你先用15%的胶走电泳，看看效果，如果电泳条带还可以，继续WB。如果不行，换Tricine SDS-PAGE，应该可以达到比较好的效果。

• cwcwcww (2013-12-26 15:49:00)

  
  除了楼上说的要注意事情外，转膜时间不要太长，一般100V/350MA的话，30-45分钟即可

• tuuu2 (2013-12-26 15:49:24)

  
  我最近做10kd，以及14kda的蛋白，用的是tris-sds-page法，转膜时间90分钟，发现杂带多，而且二者条带似乎在同一位置.奇怪的是阳性对照组织中（肝脏）二者的表达很浓，条带位置比心脏组织中的要低，不知道是什么缘故？请高手指点。

• yueban-1147 (2013-12-26 15:51:19)

  
  我想在这里请教一下20kDa的蛋白转膜时有什么要求？比如膜的种类、膜孔径大小上的要求，转膜电流及时间要求。我用的是0.45um的PVDF膜，怕蛋白太小会转过了。期待有人指点。

• dongdongqiang (2013-12-26 15:56:01)

  用0.2um的PSQ膜吧

• hold住 (2013-12-26 15:58:17)

  除了楼上说的要注意事情外，转膜时间不要太长，一般100V/350MA的话，30-45分钟即可
  
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  我们实验室现在只有0.45um的PVDF膜，想问我做9K的是不是一定要换更小孔径的膜？

• greenbee (2013-12-26 16:13:42)

  
  我做的7.5kDa的蛋白，用的15%胶，0.22孔径PVDF膜，转膜300mA，50分钟，什么也没有

• hold住 (2013-12-26 16:14:03)

  
  我最近用15%胶，0.22孔径PVDF膜，转膜350mA，40分钟，有条带，但很不好看，哪位高人有改进的方法吗?

• greenbee (2013-12-26 16:14:29)

  楼主能做出来啊，我做的7.5kDa的蛋白，准备放弃了

• hold住 (2013-12-26 16:15:37)

  QUOTE:

  原帖由 greenbee 于 2013-12-26 16:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  楼主能做出来啊，我做的7.5kDa的蛋白，准备放弃了

  隐约能见到的条带，觉得有希望，所以想能不能急需优化条件做出来

• mimili_901 (2013-12-26 16:15:58)

  
  可以的，我做的也是这个大小，半干转，没问题！0.22的NC膜！

• remenb (2013-12-26 16:16:21)

  
  请问各位做小分子蛋白的你们用的marker跑的怎么样小分子的条带清楚吗？请推荐点质量可以的小分子蛋白marker谢谢！

• remenb (2013-12-26 16:16:43)

  我最近用15%胶，0.22孔径PVDF膜，转膜350mA，40分钟，有条带，但很不好看，哪位高人有改进的方法吗?
  
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  楼主怎么做的？电泳是什么条件？

• birdfish (2013-12-26 16:17:31)

  
  我在做13Kd左右的蛋白，转了几次都没有转上，求半干法的转印条件，要毕业了，实验还没有进展，郁闷啊

• hold住 (2013-12-26 16:18:00)

  楼主怎么做的？电泳是什么条件？
  
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  电泳是100V半小时后60V一小时

• hold住 (2013-12-26 16:18:38)

  可以的，我做的也是这个大小，半干转，没问题！0.22的NC膜！
  
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  我用的是湿转法的，觉得条件还是没优化好，有好建议吗？