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【求助】如何知道我要检测的蛋白
【求助】如何知道我要检测的蛋白
我们想委托公司做WB.
但是公司只提供检测带有组氨酸标签(His-Tag)蛋白质样品的服务.
那么如何知道我要检测的蛋白 是 带有组氨酸标签(His-Tag)蛋白质呢?
请各位指点一下.谢谢了.
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【求助】如何知道我要检测的蛋白
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-12-28 15:34 作者: 红茶可乐 来源: 分析测试百科网
最新回复
qhyu (2013-12-28 15:35:26)
H2O (2013-12-28 15:35:49)
红茶可乐 (2013-12-28 15:36:09)
只能是通过实验方法么? 不能从该蛋白的NCBI序列上看出么?
TAT (2013-12-28 15:36:25)
是原核或真核表达的蛋白吗〉？你的蛋白用什么表达载体表达的？看一下载体上有没有组氨酸标签
qumm1985 (2013-12-28 15:36:49)
把表达蛋白的载体看一下，就知道是否含有His标签了
hulu呼噜 (2013-12-28 15:37:22)
QUOTE:
有序列，查查看就可以了啊。找找序列里有没有连续的his。你这个是天然蛋白，或是别人做的蛋白啊？
天然蛋白序列中有连续his的可能性很小，别人做的重组蛋白问一下做的人也可。
不过我怀疑你那个做WB的公司做这个histag为抗原位点的WB试验根本就没有你所想要的WB的意义了。WB的目的是为了检测某个抗原蛋白是否存在，或某个抗体是否与已知的抗原蛋白作用。你如果用histag来检测就没有了检测的意义，即使有阳性反应，那也只能说明这个蛋白中有histag而已，而不能证明是你设想的蛋白。
33号 (2013-12-28 15:37:46)
QUOTE:
我不同意楼上的说法。我就是一个抗体制备公司的技术人员。如果我为你做一个WB的技术服务，我只能保证我的实验技术没有问题，这个我就可以通过his抗体的WB实验来证明；但我不能保证能检测到你的目的蛋白的存在或某个抗体是否与你的目的抗原蛋白作用，这是因为我不能保证你的目的蛋白确实存在或者你的检测抗体确实好用。hulu呼噜 (2013-12-28 15:38:34)
QUOTE:
好像我的说法与你所说的并没有任何冲突啊？我的意思是，用histag抗体来检测他的目的蛋白应该对楼主想要的试验意义没有支持作用。诚然，公司用histag抗体做出来了阳性结果，证明了公司的WB试验技术很棒，那么对楼主有什么意义呢？只是告诉了他蛋白中有histag，甚至有几个his连续的都不能啊。histag应该不是楼主想要的知道的蛋白功能吧。他想要的WB应该是目的蛋白与这个蛋白特异性抗体的作用（除了histag）。就像我们平时做基因工程的histag重组抗原，用WB来检测所用的抗体应该是针对这个蛋白非histag部分的抗体。
不知道是否你误会了，我没有任何贬低做WB技术服务公司的意思。
wu11998866 (2013-12-28 15:39:02)
你这个是天然蛋白，或是别人做的蛋白啊？
天然蛋白序列中有连续his的可能性很小，别人做的重组蛋白问一下做的人也可。
不过我怀疑你那个做WB的公司做这个histag为抗原位点的WB试验根本就没有你所想要的WB的意义了。WB的目的是为了检测某个抗原蛋白是否存在，或某个抗体是否与已知的抗原蛋白作用。你如果用histag来检测就没有了检测的意义，即使有阳性反应，那也只能说明这个蛋白中有histag而已，而不能证明是你设想的蛋白。
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我做的应该属于天然蛋白，在NCBI上查了，无连续的his。重组蛋白？ 好深奥阿
【求助】如何知道我要检测的蛋白