【求助】蛋白透析之后是怎么了？

最新回复

• 831226 (2013-12-28 17:17:09)

  我也出现过这样的现象，但不知道是为什么。

• duoduo (2013-12-28 17:17:30)

  
  顶。我也出现了这样的情况，但我做ELISA后效果还是可以，那些絮状的东西摇了之后少了一些，但还是有的。也不理解为什么会出现这样的情况。还请高手指教。

• qianqin1977 (2013-12-28 17:19:37)

  实验室的人也经常碰到类似情况。出现这种情况时，透析的蛋白量应该比较大，浓度还比较高。不知道是不是蛋白析出，如果是，那肯定是变性的蛋白。猜测，自己还没处理过。

• uuooii (2013-12-28 17:19:55)

  
  我又遇到这种情况了，蛋白浓度很高，可能是变性了。

• gogo (2013-12-28 17:20:20)

  蛋白透析沉淀的；
  离心去除不影响活性，就我个人而言。
  您可降低蛋白的浓度或透析缓冲液中加点甘油（10%）。

• yonger (2013-12-28 17:21:36)

  
  确实是蛋白沉淀了，我也遇到过这样的问题，离心后将蛋白沉淀做SDS-PAGE，确实是目的蛋白。但是一直没有找到解决的方法，谢谢蛋白之氨基的建议，我回头试一下加点甘油看看。

• yonger (2013-12-28 17:26:59)

  还有我做的时候沉淀是可以用纯化蛋白用的Elution buffer 复溶的，所以蛋白沉淀大家千万别扔掉哦，复溶后还能用。

• IAM007 (2013-12-28 17:27:33)

  
  透析后蛋白沉淀一般是透析液和开始的蛋白保存液的离子强度差异比较大而引起的，常常采用的方法是降低初时的蛋白浓度，或者适当提高透析液的盐浓度，有的时候沉淀的蛋白在一定的条件下是可以复溶的，但大多数情况是沉淀的蛋白难以再溶解，或者溶解后蛋白活性降低或者丧失。

• niangao1980 (2013-12-28 17:27:55)

  
  实验室的师兄说,这些沉淀并不影响实验,但是会降低蛋白的浓度.我前些时侯看了下蛋白纯化专区,说DTT加入量也可能与之有关系,不知会不会是DTT加的太多了,因为按那个讨论上说,DTT不能加入太多,太多了会把二硫键给裂解了,也会有影响的.

• 7437654 (2013-12-28 17:28:40)

  
  DTT是巯基保护剂，肯定是要加的。不过高浓度DTT会断裂二硫键倒是没听说过。
  如之前几位大大说的，透析出现沉淀是常见的问题。除降低蛋白浓度外，还可以尝试分步透析。如1M的盐先用0.5M盐溶液透析，在降到0.3M。。。。。。
  这种沉淀只会损失蛋白，一般不会损失蛋白活性。
  另外，由于透析后一般溶液体积会有所增加，所以我认为你的蛋白损失并不算很大，属于正常范围。

• 30moonriver (2013-12-28 17:28:58)

  你好，请问一下那个elusionbuffer成分是什么呀？

• gogo (2013-12-28 17:29:33)

  
  我刚做了，透析袋里有小小的絮状物，过滤以后还有。师兄说可能是长菌了，不知道咋办了

• plaa (2013-12-28 17:29:59)

  
  透析在20mM醋酸中不易析出

• 98776langtao (2013-12-28 17:30:23)

  
  我最近也反复出现这种情况，请问大家有没有好的方法啊？现在很苦恼这个，
  非常感谢！

• 00无名指00 (2013-12-28 17:30:48)

  
  问个问题，在透析的前后，你的buffer有没有改变？
  另外 ：染菌是否可以通过增加抗生素来顶一下呢?如果抗生素不影响测定结果的话，可以试试，感觉还是蛋白浓度大了，buffer不合适，聚合了

• lixi559 (2013-12-28 17:31:17)

  
  我的Elution buffer 里面的成分是 8M尿素，250mM咪唑，500mM Nacl,20mM Na3Po4。透析的液体是梯度减低的尿素（8M-3M-2M-1M-0.5M-0M），另外还有20mM的Tris。以前按这个方案透析不会有蛋白析出的，最近换了一个蛋白，同样的方案蛋白就是析出，所以很着急，希望大家帮忙给些建议。

• PCR (2013-12-28 17:31:40)

  
  我透析蛋白中的triton-114去污剂透析的时间在5h-12h之间，但透析过后，感觉去污剂好像没有透析出去，蛋白溶液还是那么粘稠，不知各位用的是什么透析液，我用的是0.1M和0.05M的TBS.