【求助】上图，帮忙看下奇怪的电泳图。

最新回复

• DONT (2014-1-06 15:05:10)

  
  没有加marker，而且条带颜色很浅。

• wood533 (2014-1-06 15:07:04)

  
  可能有以下原因：
  1. 蛋白没有提出来，或者提取不够充分
  2. 上样量太少
  3. 染色时间太短，脱色不充分
  4. 染色液问题，建议换新的染色液

• 831226 (2014-1-06 15:08:00)

  
  点样量不够。

• DONT (2014-1-06 15:09:26)

  QUOTE:

  原帖由 831226 于 2014-1-6 15:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  点样量不够。

  我分别用了10，15，20，25的，可是跑出来都一样，颜色很浅。而且为什么下半部分没有了？

• greenbee (2014-1-06 15:09:45)

  
  配完胶后先加个预染marker看看是不是你的电泳体系有问题。

• 831226 (2014-1-06 15:10:27)

  QUOTE:

  原帖由 DONT 于 2014-1-6 15:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  我分别用了10，15，20，25的，可是跑出来都一样，颜色很浅。而且为什么下半部分没有了？

  你说的是点样的体积，我说的是蛋白量。
  蛋白电泳顾名思义是跑蛋白不是跑水，如果是表达上清蛋白量很低你可以考虑用三氯乙酸沉淀，然后丙酮清洗，然后加样品缓冲液。

• DONT (2014-1-06 15:11:12)

  QUOTE:

  原帖由 831226 于 2014-1-6 15:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  你说的是点样的体积，我说的是蛋白量。
  蛋白电泳顾名思义是跑蛋白不是跑水，如果是表达上清蛋白量很低你可以考虑用三氯乙酸沉淀，然后丙酮清洗，然后加样品缓冲液。 ...

  我昨天又跑了，用的和第一次一样的蛋白量，而且跑得条带又多了一条，可是分离胶的下半部分还是一片空白，而且条带颜色很浅，我的蛋白是从组织里新鲜提取，我觉得量还是可以的，会不会是上样缓冲液里的溴酚蓝浓度不够，因为配1％的溴酚蓝很难溶解完全。我很费解～～！！

• DONT (2014-1-06 15:14:00)

  
  我是45微升的蛋白溶液加45微升的上样缓冲液（2*），上样10微升共九个孔，是不是上样量太小了？

• kuohao17 (2014-1-06 15:14:24)

  
  你第一次做电泳，就必须做考染吗？如果不是必须的，就接着向下做，只有最后的结果才是最重要的，不用在乎这个吧。做实验一定要直到目的，不要半途而废

• ritou1985 (2014-1-06 15:16:43)

  
  如果蛋白量不足，楼主可以尝试一下银染，灵敏度要高很多

• gogo (2014-1-06 15:17:00)

  
  为什么不用5*的上样缓冲液？
  胶孔体积是固定的，你加缓冲液越多，就意味着样品的加入量越小。
  溴酚蓝你可以用加热来溶解，只要注意不要沸腾溅出，溶解很快的。

• DONT (2014-1-06 15:17:35)

  QUOTE:

  原帖由 gogo 于 2014-1-6 15:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  为什么不用5*的上样缓冲液？
  胶孔体积是固定的，你加缓冲液越多，就意味着样品的加入量越小。
  溴酚蓝你可以用加热来溶解，只要注意不要沸腾溅出，溶解很快的。 ...

  如果样品在浓缩胶积压了该怎么办啊？是不是浓缩胶的浓度太大了？我现在用的是5％的。

• jkobn (2014-1-06 15:30:13)

  
  感觉你的浓缩胶体积比较小，蛋白是否都处于同一起跑线上。

• 6327555 (2014-1-06 15:30:56)

  我最开始也遇过这样的问题。
  1、我认为不是buffer的问题，我用的一直是2*的，后来的图片一直还可以，附一张你可以看看。
  2、浓缩胶用5%的足够了，不需要太大的。
  3、我认为也不是蛋白量的问题，只要有一定会跑出来条带的，只是条带粗细问题而已。
  从你的图片上看，你的上层胶的量稍微有点少，但这不是影响你的图片的关键。我觉得可能有些其他的因素影响了你的结果。
  1、你是第一次跑电泳，我不知道你的上样时间有多长，过长的上样时间会导致你的蛋白弥散，建议你加快上样速度。
  2、你的电泳体系可能有问题，缓冲液不知是不是回收的，反复多次使用的缓冲液也会出现这样的结果。建议你把所有要用的溶液全部更换成新配的试试。
  3、你的电泳不知跑了多长时间，太长的时间对结果也会有一些影响，建议你跑时间长的话可放在冰盒中进行。
  以上仅供参考，具体问题还需要你在试验中不断摸索总结，祝实验顺利！

  
  47436071.snap.jpg

• 98776langtao (2014-1-06 15:31:30)

  
  电泳体系中存在问题，建议更换新鲜试剂再做尝试！

• 98776langtao (2014-1-06 16:05:31)

  是不是电泳缓冲液忘了加SDS?

• greenbee (2014-1-06 16:06:27)

  
  试剂问题吧。包括丙烯酰胺和APS等。你的卡玛斯亮蓝没有问题的话，这个胶往下做是肯定没有结果的哦。一步一步的来，先用人家跑的好的电泳液，如果还这样。就把做胶的一套全换掉。

• u234 (2014-1-06 16:07:23)

  
  一个LZ可能不会犯的错误，我说出来是我犯过，因为没人教，自己乱作时候犯的。
  蛋白上样的时候应该先加电泳液，然后再上蛋白样，如果顺序返了，蛋白样品就会被冲的弥散，这样跑到后来就是整个胶都染了，但是每道上看不到蛋白。
  另外，楼主应该加个MARKER，这样出问题的时候，便于分析。