【求助】目的蛋白117KDa，内参37KDa，湿转......

最新回复

• yueban-1147 (2014-1-07 11:27:07)

  
  我觉得可以一起转，我的内参是42KD,目的蛋白是273kd,都是一起转的，并且转的还行

• one (2014-1-07 11:28:18)

  
  楼上的说说转膜什么条件好吗?
  我认为,如果怕小的分子转过头,你可以把胶和膜都分成两份,
  37KD的内参可以转完先取出来，大分子量的转更长的时间。

• kuohao17 (2014-1-07 11:29:09)

  
  可以，一般情况下蛋白是不可能穿透膜的，不信可以把转完的膜染色看看，肯定只有贴着胶的一面有，反面是看不到条带的（当然如果对着明亮的光线也能看到反面的蛋白）。

• 98776langtao (2014-1-07 11:29:43)

  QUOTE:

  原帖由 kuohao17 于 2014-1-7 11:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  可以，一般情况下蛋白是不可能穿透膜的，不信可以把转完的膜染色看看，肯定只有贴着胶的一面有，反面是看不到条带的（当然如果对着明亮的光线也能看到反面的蛋白）。 ...

  那我的marker转到NC膜上了，膜反面也有但颜色浅，这样是不是说明已经转过头了？

• one (2014-1-07 11:31:22)

  
  marker好像不太好说明问题，有些marker一转颜色就变浅，甚至要是滤纸比较厚的话，在滤纸上也能看见marker的颜色，让人感觉像是转过头了。不放心的话在跑完胶后把胶切成两半用两个夹子转，一个时间长一点，一个短一点。

• utt0989 (2014-1-07 11:31:42)

  
  我想可以的，通常我都是一起转膜，然后整膜扎目的蛋白，接下来，strip，扎其他目的蛋白，最后扎内参照。一张膜可以使用2-3次。你若怕转过头，可以分别染膜和胶，，看看是否有你要的条带。另外，可以买blotting pipette阻断目的蛋白，以证实你要的蛋白条带的存在。不建议将膜剪开分别染或分别转，这样有可能影响结果的可靠性。
  希望，我的建议对你有用。

• daod (2014-1-07 11:32:10)

  
  可以，我的目的和内参和你的差不多，一般湿转一个半小时，恒压一百伏。效果挺好。