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【求助】beta-actin内参强弱不等!
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我在同一凝胶上跑了两种肿瘤的标本，但是上样蛋白总体积都是50微克，为什么显影后beta-actin条带强弱不一样呢，两组间beta-actin比较有差别，但是每组间几个样品是一样的，向各位高手请教啦
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-1-07 15:43 作者: vera+ 来源: 分析测试百科网
最新回复
pengke1983 (2014-1-07 15:43:58)
相关疾病：
肿瘤
这个当然正常阿，你不同的肿瘤，其表达很可能有不小差异的
966735obeng (2014-1-07 15:44:19)
???ACTINb不是组成型表达吗？怎么可能会有差异？如果有差异又怎么可能拿来做内参？
966735obeng (2014-1-07 15:45:35)
当然可能有差异了，你用GAPDH内参再试试
redbutterfly (2014-1-07 15:45:57)
vera+ (2014-1-07 15:46:15)
非常感谢各位战友，呵呵，不过就是有分歧，希望以后诸位继续补充哦因为问题还没有解决嘛
wu11998866 (2014-1-07 15:47:26)
你的蛋白定量方法不可能是完全准确，当然内参会有差异，关键是看内参差异是否在可容忍的范围内。像一般的蛋白定量试剂盒方法（好像叫Lorry法？）是会有一定的误差的。
此外在上样的时候，每孔上样尽量小心，用细长的枪头要好点，一般的2ul的白枪头都可能会有溢出导致出现误差。
tangxin_80 (2014-1-07 15:47:46)
actin 本身的差异，这在不同的样本中很常见，建议楼主在做预实验的时候多几个内参，选一个比较保守的。一般来说，GAPDH在加了某些药物后表达还会有变化，actin 在不同的组织中的表达也是有变化的。相对比较保守的内参有泛素（UBC）还有胆色素原脱氨酶等。
你可以试试，希望对你有用。
flower-201 (2014-1-07 15:48:05)
如果想内参条带调的完全一致的话,有个办法就是根据内参曝光后IOD值即其灰度值来做调整上样量.即使同组标本,上样量排除上样误差的影响,内参条带多少也是有差别的,如果根据灰度值调整了后,能让结果更准确些
mimili_901 (2014-1-07 15:48:26)
楼主本身实验设计就是有问题的，所以导致你试验出现问题无法解决。你的根本问题就是认为所有细胞的actin表达量都是一样的！这是一个很严重的错误思想。内参之所以能成为内参是因为它们在相同的细胞内其占总蛋白的比例基本相同（不是完全相同，不同条件下也会有差别）并且表达量巨大，像WB这种最多只能半定量的实验无法识别其细微差别，所以才能成为内参。因此不要简单的把内参想象成所有细胞表达都一样的。
lxh031 (2014-1-07 15:52:18)
非常感谢各位的大力相助！看来在不同的细胞中actin的量表达是不一样的！学了很多东西啊！!
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