【求助】Ni柱蛋白纯化后的透析

最新回复

• fei1226com (2014-1-07 17:45:45)

  也许蛋白沉淀了，留意看是不是有沉淀．

• BOSS2011 (2014-1-07 17:46:04)

  看看你的蛋白大小是多少，然后看下你的透析袋的截流的大小是多少，不要太大了，蛋白都透析到外面去了。
  还有就是楼上说的看看有没有沉淀

• 小野花 (2014-1-07 17:46:25)

  这个正常吧!我们实验室做过的蛋白基本上经过透析含量都会减低.

• BOSS2011 (2014-1-07 17:46:44)

  
  还有，你还得看看你的前后buffer，透析后浓度是会有变化的，你看看的蛋白总量对不对。

• 66小飞侠 (2014-1-07 17:47:06)

  还有就是纯化柱子，别买错了！分两种，NTA,和IDA,有一种结合蛋白不行！抓不牢！

• DNA (2014-1-07 17:47:53)

  最近在做Ni柱蛋白纯化，大部分的产量都不高，这次得到的蛋白质约1mg/ml，高兴了一阵子，可是透析后再测蛋白却只有0.05mg/ml了，气死我了，不知道怎么回事，请大侠帮帮忙，告知Ni柱蛋白纯化后的透析关键，有哪些要注意的，我是在PBS中透的，实验现在就卡在这一步，得不到好的浓度就没办法往下做，着急啊，在此谢谢各位了
  
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  蛋白透析后测浓度差这么大，头一回见，你提供的信息也不是太全，个人觉得有几下几个原因：
  1.蛋白沉淀了，这个楼上也有人说了，但按理说沉淀了你也应该看的见的啊；估计不是；
  2.透析前含有大量的咪唑，这个会有一定的吸光值，但也不会差这么大；
  3.浓度测定不准确，其实测浓度也是有一定的浓度范围的，个人的建议是你结合你的PAGE电泳，看蛋白条带的量，再比较下；
  祝好运！

• caihong (2014-1-07 17:48:11)

  
  米唑引起的吸光度没有那么大，影响最大的是Triton-x100
  如果你上完样后平衡柱子的缓冲液中有X100，那你洗脱的时候柱子里残留的那一点点X100足够引起极大的吸光度
  另外你可以跑个电泳来预估一下蛋白浓度，用一定浓度的BSA样品做参照