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【求助】SDS-PAGE

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-1-08 21:49    作者: seagate    来源: 分析测试百科网

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各位同行，最近本人跑了一些SDS-PAGE的胶（分离胶:12.5%），发现条带很弥散.之后就改用15%的分离胶试了下，发现没能达到成带的效果，反而一些大分子量的条带更难分开。请大家帮忙给点方法，谢谢~！
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  • seagate (2014-1-08 21:50:26)


    上面那张是12.5的分离胶跑出来的。这张是15%的分离胶跑出来的：


    82456096.jpg

  • gogo (2014-1-08 21:50:51)


    上样量太大了，你的目的带有多大？目的带分开基本就算成功了

  • seagate (2014-1-08 21:51:35)


    我的上样量是4微克/微升，可是从上样孔那里看浓度似乎也不算大，但是觉得条带还是比较涣散不清。 下面密集的那些带都是我的目的条带，它们的分子量大约在10-20KDa.

  • kswl870 (2014-1-08 21:51:54)


    是不是蛋白裂解液有问题？！如果蛋白裂解不好可能也会出现这种问题，
    还有救是我碰到过的问题：配制电泳液时出了问题，把tris盐酸当成tris base用了，结果跑出来的胶也很弥散

  • gogo (2014-1-08 21:52:14)

    10-20KDa的蛋白我一般都用13%以上或者小分子胶来跑，这样效果比较好。
    根据你说的，你也可以试一下加大胶的浓度

  • ii077345 (2014-1-08 21:52:37)


    建议你换一下跑胶系统，Tris-tricine系统比甘氨酸系统分辨率更高，且跑出的胶也比较好看。最主要的是它不会在最下边压成一片！

  • 兔纸 (2014-1-08 21:52:59)


    第一,我感觉你的APS浓度过大,分离胶凝的过快.你试下调低APS浓度.
    第2,你可以试下将2×loading buffer 中加入多点甘油,这样能使蛋白在浓缩胶中充分压缩,便于跑开.
    我师姐在做蛋白测序的时候,也遇到上述的问题.最后是这样解决的.希望你好运!

  • zhezhe (2014-1-08 21:53:35)


    从楼主的电泳图看，Mark很清晰，不存在弥散现象，说明胶本身不问题。
    可能是此种蛋白成份复杂造成条带过多、上样量过高造成，或是此蛋白不适合采用此体系电泳方法进行检测。
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