【求助】为什么全蛋白跑胶出来的小分子量条带看不见

最新回复

• one (2014-1-09 14:53:35)

  用多大浓度的胶？有胶图贴上来看看！

• xiaoxiaoniao (2014-1-09 14:53:55)

  
  谢谢楼上的提议。用的是12%的胶。
  顺便问一下，为什么目的蛋白分子量不同对应使用不同浓度的分离胶，如果小分子量的蛋白用孔径较大的胶就是会跑得快一点，那么是不是只要我减小电压缩短跑胶时间就可以了呢？

  
  91119716.snap.jpg

• redbutterfly (2014-1-09 14:54:47)

  
  孔径不一样，分离范围就不一样，扩散程度也不一样
  你的目标蛋白分子量是多少呢？12%的分离胶也不算很高
  另外样品是不是没有离好心？

• xiaoxiaoniao (2014-1-09 14:57:09)

  
  目的分子的分子量为52KD，我是觉得用全蛋白中跑出来的小蛋白怎么会这么少呢，样品40000g30min，不知应该怎么调整？

• xiaoxiaoniao (2014-1-09 14:58:27)

  又做了几次，就是会出现图示两条那种像铁轨样的竖条纹，有人说是DNA影响，这样说有依据吗？没有完全裂解的DNA是如何影响蛋白的电泳呢？什么是边缘效应，这种算不算呢？

• lxh031 (2014-1-09 15:01:27)

  不是边缘效应，在上样前可以稍稍把处理好的样品离心下，4，5千半分钟就行，取的时候吸比较靠上层的液体，不要吸到沉淀，是菌体碎片导致的“铁轨”。还有，中间的是Mark吗？你用的多少的，好像没跑下来一样，也没有看到小条带的Mark呀，你的缓冲液有没有换一下试试

• xiaoxiaoniao (2014-1-09 15:02:04)

  
  这张图没用Marker，煮沸后又离心过的，可能把沉淀吸进去了吧，我用的是细胞，没有细菌碎片。缓冲液会影响什么呢？

• ending (2014-1-09 15:05:07)

  
  缓冲液要是pH不对或者用的时间过久离子浓度有改变，可能跑不下来，中间这个孔看，觉得你的胶没跑下来，但是跑胶的时候看溴酚蓝是跑到底了的，还有你配胶的试剂，用别人的看看。

• flower-201 (2014-1-09 15:05:31)

  我是转膜后丽春红染时，情况差不多，胶是怎么染成这样子的呢我也想看看是胶没跑下来，还是转膜没转上。

• gogo (2014-1-09 15:05:56)

  
  你这个图应该还可以继续跑，可以让那些小分子都跑出去，那样你的目的带基本可以分开了。
  10几KD的小分子要用tricine电泳。

• xingyi08 (2014-1-09 15:07:37)

  
  首先你的上的样品质量有些大，建议下次用这个量的1/2--2/3试试；我跑的蛋白也是50K多点，用8%的分离胶，10mA恒流（如果闲时间长改到15mA也行），这样跑出来的条带效果非常好。另外电泳缓冲液用过5次后建议更换一下，否则影响跑胶效果

• tangxin_80 (2014-1-09 15:09:08)

  
  我也遇到过这种情况，用新配的染色液就行了！