【求助】照片后发现胶片背景过暗是什么原因

做western blot压片后出来发现胶片背景太暗,不好扫描。请问这是显影或定影哪里时间掌握的不恰当麽?望路过的达人解答下哦~谢谢o(∩_∩)o
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最新回复

  • PINK (2014-1-09 15:21:12)

    几点不成熟的意见:
    1.一抗浓度是否太高,建议做梯度。
    2.二抗浓度过高,1:5000或1:10000
    3.洗膜不干净,5-10min 3次。
    此现象和曝光时间关系不大,优化上述条件,会有大的改观。
    祝好运。
  • 987789 (2014-1-09 15:21:32)


    楼主说的背景太暗是不是指的,胶片比较黑,
    可能的原因一般2个:
    一是胶片太久了,每次打开胶片盒的时候,虽然在暗房,但都有缓慢曝光的过程。
    二是最可能的原因,显影之后,没有用流水冲干净,就放进定影液。我自己试过,不冲直接放进定影液后的胶片,和冲洗后的比较,没冲的胶片,明显变暗,而且,胶片表面有一种灰蒙蒙的感觉。
    希望有帮助。
  • 49888 (2014-1-09 15:21:57)

    QUOTE:

    原帖由 987789 于 2014-1-9 15:21 发表

    楼主说的背景太暗是不是指的,胶片比较黑,
    可能的原因一般2个:
    一是胶片太久了,每次打开胶片盒的时候,虽然在暗房,但都有缓慢曝光的过程。
    二是最可能的原因,显影之后,没有用流水冲干净,就放进定影液。我自己试过,不冲直接放进 ...
    1.胶片曝光的黑和背景暗是两码事吧,二者差别很明显。
    2.我们科室从来不会显影后冲洗,直接放入定影。胶片背景都很干净啊~~~~~~~~~~
    仅供探讨~~~~~~
  • bring (2014-1-09 15:22:22)

    QUOTE:

    原帖由 987789 于 2014-1-9 15:21 发表

    楼主说的背景太暗是不是指的,胶片比较黑,
    可能的原因一般2个:
    一是胶片太久了,每次打开胶片盒的时候,虽然在暗房,但都有缓慢曝光的过程。
    二是最可能的原因,显影之后,没有用流水冲干净,就放进定影液。我自己试过,不冲直接放进 ...
    恩恩 您理解得很正确,就是胶片比较黑(同期的另一张是不黑的),所以可能是显影的问题,可能是显影时间长了或是显影后漂洗地不彻底。谢谢您的指点^_^
  • vivian4123 (2014-1-09 15:22:51)


    如果显影液和定影液失效也会造成背景深、背景和蛋白条带对比不明显的情况。
  • bring (2014-1-09 15:23:45)

    QUOTE:

    原帖由 vivian4123 于 2014-1-9 15:22 发表

    如果显影液和定影液失效也会造成背景深、背景和蛋白条带对比不明显的情况。
    哦~ 恩 记住这个影响因素了~对初涉western的我来说,谢谢诸位高人指点哦^_^
  • bring (2014-1-09 15:24:13)


    昨天做了试验了,最终结论是因为显影时间过了,显影其实只要看到条带出来就可以终止了,初做的我傻乎乎的,条带出来了还一漂再漂。。。嘿嘿 在这也给初涉western的战友们提个醒,显影时间过了会导致背景暗的~嗯
  • IAM007 (2014-1-09 15:24:37)


    再定影液里多泡泡,如果泡短了,片子就会不干净,有点灰蒙蒙的感觉。