【求助】请问为什么我跑电泳出现两个条带

最新回复

• huifeng0516 (2014-1-09 15:59:16)

  正常情况，不是什么两条带，个人觉得是小分子跑得快，不影响结果的。

• ququer787 (2014-1-09 15:59:46)

  
  谢谢关注，不知楼上说的小分子指的是什么，是全蛋白中分子量比溴酚蓝更小的吗，如果是的那么怎么能看得见呢？

• 49888 (2014-1-09 16:17:11)

  
  前面的是溴酚蓝，后面的可能是杂物，应该不影响幸福，不用理他

• ququer787 (2014-1-09 16:18:00)

  
  请问我是哪里出了问题呢，是不是Loading Buffer没有配好？因为我又做了一次，有一个泳道放了maker，那个maker跑得很好。

• pengke1983 (2014-1-09 16:18:19)

  我个人认为不好说，你的情况

• DONT (2014-1-09 16:18:53)

  
  电压是多少呢，恒压不要超过120V吧，如果电压高建议跑的时候冰水浴。
  破菌是什么方法呢？超声破碎的时候是不是时间太长了？我出现过一次，像是打焦的蛋白，不确定

• ququer787 (2014-1-09 16:20:56)

  
  我是提取细胞的全蛋白，所以只是破碎了细胞，0.2s 停2s 共30s。

• xue258 (2014-1-09 16:21:18)

  细胞我一般反复冻融就可以裂解了，0.2S一次打了30S就是破碎了150次，不用这么多，我们实验室打细胞一般打5S停10S，打4，5次就好了，细胞很好裂解，还有功率不能太大，打的时候要冰水浴

• PCR (2014-1-09 16:22:26)

  如图所示，每个泳道都有两条带，高手可知什么原因吗？
  
  =====================================================
  
  没事 正常情况，好像我每次跑的都是这个样子的
  可能是我进入分离胶用200v恒压的原因吧，而且是在室温 哈哈
  不过用来发文章绰绰有余了。。。

• taoshengyijiu (2014-1-09 16:23:18)

  
  两条前沿的情况在我们的实验中也很常见， 而且是后一条为深蓝色， 前一条呈淡紫红色，原因据我所知是因为你的溴芬兰溶液的浓度太高， 稀释一点就不会出现两条了（溴芬兰使用前一半是配成0.01%的储液， 使用时候添加）

• yonger (2014-1-09 16:23:38)

  
  请问你的loading buffer应该没有用成DNA的loading buffer吧？
  TaKaRa的DNA loading buffer是有两种染料的。

• ququer787 (2014-1-09 16:23:56)

  
  没有用DNA的loading buffer。我也是200v恒压，室温。我这种两条带的情况在从组织所提的蛋白中没有出现。似乎不影响做western，但是理论上说溴酚蓝不是纯净物吗，怎么会跑成两天带呢？上灵宝儿说的超声方法中细胞超声次数虽然减少，但每次时间较长，总时间也是20秒左右，是不是与我的超声效果也是差不多的呢？