【求助】为什么最近跑胶mark 可以跑的开而蛋白分子...

最新回复

• yjf1026 (2014-1-14 10:26:17)

  
  我的Maker本是六条带，现在跑电泳也只有四条带，下面的条带和相应的蛋白都跑不出，也很郁闷

• huifeng0516 (2014-1-14 10:26:51)

  两位战友提供的信息都比较少，粗略的分析一下原因可能如下：
  楼主的问题可能在蛋白样品的处理上面，样品的盐度、蛋白浓度，或者其他的一些因素导致了你的蛋白跑不开，请提供一些详细信息供战友们分析。
  楼上的问题可能是电泳时间跑太长，最下面的小分子条带跑出胶外面去了。当然这也只是猜测。

• DONT (2014-1-14 10:27:17)

  
  蛋白样品的应该没有问题吧！以前做的出来啊

• yjf1026 (2014-1-14 10:27:39)

  
  我缩短了时间，分离胶跑了三分之二就停下了，但是还是没有下面的条带。

• nut6694 (2014-1-14 10:28:02)

  
  你的ap是不是 过期了撒 ap分装好啊 每次用一支 一般12%的胶就ok了的 除非你的蛋白很小

• DONT (2014-1-14 10:28:23)

  
  s我的也没有下面的条带啊

• DONT (2014-1-14 10:29:25)

  还有为什么电流很小啊，80伏的恒压电流只有20毫安以前不是这样的哦

• yes4 (2014-1-14 10:29:54)

  我缩短了时间，分离胶跑了三分之二就停下了，但是还是没有下面的条带。
  
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  你是跑 SDS-PAGE？
  不知道你的 Marker 是否带颜色，所以我无法判断你说的剩下4条带，是上面大分子量的4条，
  还是下面小分子量的4条。
  调整一下胶的浓度，胶浓度不是一成不变的，只有适当的胶浓度才能得到理想的结果。
  需要自己摸索。

• yes4 (2014-1-14 10:30:11)

  以前也是用同样的方法做，可以做的很好！现在死活也做不出了啦急！面临着马上毕业请各位指点啊！用的是15%的浓缩胶，前50分钟用的是80伏的恒压，然后用的是120伏的恒压。可是电流不是很大也就是20毫安左右
  请各位指点一下哦！不胜感激！
  
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  为什么最近跑胶mark 可以跑的开而蛋白分子抛不开了呢 ？？？
  不知道，蛋白跑不开，是怎么得出来的结论。所以无法判断原因。但上面的战友说的是对的，
  loading buffer 中组分浓度不同，蛋白质在 SDS-PAGE 中的位置会有一些不同。

• mamamiya (2014-1-14 10:30:38)

  我缩短了时间，分离胶跑了三分之二就停下了，但是还是没有下面的条带。
  
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  胶的浓度不对啦。如果配制的时候没有错，胶浓度选择也没有错的话，可能是丙烯酰胺母液配制出了问题，是不是刚换了丙烯酰胺啊？建议重新配制丙烯酰胺。
  当然如果你用的胶本来就是低浓度的，如8%的分离胶的话，低分子量marker的小蛋白条带是看不到的。
  还是把用的胶，蛋白marker，和目标蛋白的分子量讲清楚吧。

• u234 (2014-1-14 10:30:57)

  
  今天我也碰到了同样的问题呢
  平时用时1.5h的电泳今天跑了4h还跑得不好，Marker 呈火箭形而且还跑到别的槽内
  很纠结，没跑开。
  明天继续。。。。

• 3648755 (2014-1-14 10:31:17)

  
  今天我也碰到了同样的问题呢
  平时用时1.5h的电泳今天跑了4h还跑得不好，Marker 呈火箭形而且还跑到别的槽内
  很纠结，没跑开。
  明天继续。。。。

• PINK (2014-1-14 10:31:35)

  重新配缓冲液吧