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【求助】请教-β-actin 的图像问题(仅一个样本粗而淡)

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-1-14 15:04 作者: u76mp 来源: 分析测试百科网

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【求助】请教-β-actin 的图像问题(仅一个样本粗而淡)

大家好.我最近做的图不知怎么搞的,一直是其中的一个样本actin跑不好.一般是倒梯形.中间白,两边黑.连跑几次都是这样.最近依次加了两边,就是中间这两个,几乎还是一样.目的蛋白差异倒是可以看的出来.没辙了.请大伙帮忙分析分析,给点提示吧.
我的条件是: 大鼠结肠标本上样30ug,恒流0.01A, 约160min
转膜恒流0.02A 60min
一抗sigma mouse mAb 1:2500; 4度过夜
二抗 goat-mouse 1:4000具体哪家忘了室温,1h
ECL 发光
请帮忙看看.多谢
前几日版主帮忙分析,认为二抗过高所致,但为何只有一个是这种表现呢.而且比其他的要宽?
再次请各位帮帮分析.非常感谢.

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最新回复

u76mp (2014-1-14 15:04:46)

这是一个月前做的,更夸张些.

49214905.jpg
lxh031 (2014-1-14 15:05:04)

样本里是不是有沉淀呢？跑胶的时候有没有发现有一部分样本留在加样孔里不怎么愿意往下跑。上样前离心试试呢？
u76mp (2014-1-14 15:06:49)

QUOTE:
原帖由 lxh031 于 2014-1-14 15:05 发表

样本里是不是有沉淀呢？跑胶的时候有没有发现有一部分样本留在加样孔里不怎么愿意往下跑。上样前离心试试呢？
这种情况到没发现过.不知还有没有其他可能.
yes4 (2014-1-14 15:07:07)

应该是样本的事，提蛋白的时候不是很好，蛋白颗粒大，跑胶的时候就留在胶的孔里出不来了
u76mp (2014-1-14 15:07:26)

QUOTE:
原帖由 yes4 于 2014-1-14 15:07 发表

应该是样本的事，提蛋白的时候不是很好，蛋白颗粒大，跑胶的时候就留在胶的孔里出不来了
请问，如果是这样的话，又什么办法可以补救的么。样本量有限阿。
okhaha (2014-1-14 15:07:44)

肯定是样本得原因。建议上样前离心5min，不要吸取管底沉渣。
u76mp (2014-1-14 15:08:08)

QUOTE:
原帖由 okhaha 于 2014-1-14 15:07 发表

肯定是样本得原因。建议上样前离心5min，不要吸取管底沉渣。
不知赵兄能否说的详细点，比如，离心的条件
00无名指00 (2014-1-14 15:08:29)

12000rpm离心2-5min都可以了
u76mp (2014-1-14 15:08:53)

QUOTE:
原帖由 00无名指00 于 2014-1-14 15:08 发表

12000rpm离心2-5min都可以了
我前日以14000g，5min的条件离心，的确是得出少许沉淀，但是WB的表现跟原来差距不大阿。不知还有什么原因没有？
ha111 (2014-1-14 15:09:12)

大颗粒离心后上样，会影响样品浓度吗？