【求助】蛋白质变性时是不是必须加上样缓冲液

最新回复

• greenbee (2014-1-14 15:25:22)

  QUOTE:

  原帖由 舞song 于 2014-1-14 15:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  蛋白质变性时是不是必须加上样缓冲液，可不可以先变性后加上样缓冲液？急！！！

  可以。

• tuuu2 (2014-1-14 15:25:53)

  QUOTE:

  原帖由 舞song 于 2014-1-14 15:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  蛋白质变性时是不是必须加上样缓冲液，可不可以先变性后加上样缓冲液？急！！！

  不太清楚你的意思
  loading buffer变性主要是SDS、DTT、加热导致的
  你说的变性是指加热变性？
  这样肯定不行，没有SDS，蛋白加热后都聚集沉淀了

• junjie05 (2014-1-14 15:26:57)

  
  可是我先把蛋白质变性（未加上样缓冲液）后，发现蛋白质中有很多絮状沉淀，不像以前那么清亮了，还能用吗？

• greenbee (2014-1-14 15:29:15)

  
  你用什么将蛋白变性的？

• ukonptp (2014-1-14 15:29:43)

  
  得加LOADING BUFFER

• moonlight45 (2014-1-14 15:30:08)

  
  我只是简单的将蛋白质加热变性，当时忘了加上样缓冲液了，汗，白忙乎了半天，貌似

• 7437654 (2014-1-14 15:30:46)

  可以变性后再加loading buffer ，加了后再煮沉淀就会消失了

• +小生怕怕+ (2014-1-14 15:31:10)

  
  可是我没有变性的蛋白质（经硫酸铵和等电点沉淀后用1M KCL复溶）一加2x或6X上样缓冲液就产生沉淀，试问何故？

• skytree (2014-1-14 15:31:59)

  经硫酸铵和等电点沉淀
  
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  请问是一步沉淀还是分两步沉淀的？怎么能确定是等电点沉淀？
  加loading buffer就沉淀多数是由于盐浓度太高引起的，可透析为PBS或其他低盐体系再做电泳。

• bamboo16 (2014-1-14 15:33:47)

  可是我没有变性的蛋白质（经硫酸铵和等电点沉淀后用1M KCL复溶）一加2x或6X上样缓冲液就产生沉淀，试问何故？
  
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  硫酸铵，KCl会与SDS发生反应而产生沉淀。

• 舞song (2014-1-14 15:34:19)

  QUOTE:

  原帖由 bamboo16 于 2014-1-14 15:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  可是我没有变性的蛋白质（经硫酸铵和等电点沉淀后用1M KCL复溶）一加2x或6X上样缓冲液就产生沉淀，试问何故？
  
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  硫酸铵，KCl会与SDS发生反应而产生沉淀。 ...

  前一次同样的实验却没有发现这种问题