【求助】原核表达蛋白质的时候出现了两条带...

最新回复

• dreaming (2014-1-14 17:34:41)

  左边是上清，右边是沉淀

  
  17998186.jpg

• qqq111 (2014-1-14 17:35:01)

  
  你在那端加的标签呀？

• vvmmoy (2014-1-14 17:35:17)

  
  我以前保存的两管同样的菌种，不是同一时候存的，有一管就会出现你这样的情况，另一管就不会，不知道为什么？

• wmp1234 (2014-1-14 17:35:47)

  
  多半是菌种本身的问题.

• dreaming (2014-1-14 17:36:16)

  
  我一共挑了7个斑 ，都是这种情况，His标签在N端

• TAT (2014-1-14 17:36:34)

  
  在N端的话会不会有的菌会表达出来不完整的蛋白呢？

• 30moonriver (2014-1-14 17:36:56)

  QUOTE:

  原帖由 TAT 于 2014-1-14 17:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  在N端的话会不会有的菌会表达出来不完整的蛋白呢？

  可以检查下最后20个氨基酸残基位置是不是有较多的稀有密码子？

• dongdongqiang (2014-1-14 17:37:13)

  我也是以前NI柱纯化后一直有两条带，（其中一条是所需的）
  但是现在连NI柱都挂不上了，不知道怎么回事

• 小糖块 (2014-1-14 17:37:45)

  QUOTE:

  原帖由 30moonriver 于 2014-1-14 17:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  可以检查下最后20个氨基酸残基位置是不是有较多的稀有密码子？

  多少算多？

• yueban-1147 (2014-1-14 17:38:04)

  我也出现过这样的情况，但是两条带相差比上图大一下，大概5kd左右。 我后来把整个纯化过程放在冰浴中（结合树脂的时候也放在冰里），问题就解决。搂主可以试一下。

• dreaming (2014-1-14 17:38:20)

  这不是纯化过程才出现的问题，表达的时候就是这样子的两条带，在最后20个氨基酸附近有一个稀有密码子，可是前面该密码子也存在的。

• huifeng0516 (2014-1-14 17:38:35)

  很可能是表达提前终止了，我在一本蛋白纯化的书上看到过这样的例子。把tag放到C端，可以避免纯化到表达提前终止的蛋白。

• utt0989 (2014-1-14 17:39:00)

  QUOTE:

  原帖由 huifeng0516 于 2014-1-14 17:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  很可能是表达提前终止了，我在一本蛋白纯化的书上看到过这样的例子。把tag放到C端，可以避免纯化到表达提前终止的蛋白。

  什么书?

• DNA (2014-1-14 17:39:21)

  期待回答，我做的也是如此。我觉得也未必是N端C端的问题，我用的是pET-32a（+），N端C端均有His标签，我表达的时候也未插入自己的终止子，但是我也出现了楼主所说的情况。分子量相差5kD左右。
  最近打算将转化出来的单菌落多挑一些做表达，看看是否都是这样，还是说菌株自身的问题。

• Ao7 (2014-1-14 17:39:40)

  
  我出现的也是两条带啊，相差就是2KD，但是这条带在诱导前就存在了，真是奇怪啊！