【求助】会蛋白分离纯化的高手请进来

最新回复

• zwsyrt (2014-1-14 23:00:49)

  再用离子交换树脂，疏水柱，型号规格自己看着办了，再不行的话，可以更换离子交换树脂，疏水柱类型，再跑一次。

• 98776langtao (2014-1-14 23:01:06)

  同意楼上的，一个柱子怎么做纯化。如果自己实验室没有条件，得到的蛋白质是为了下面的实验用，还不如找个公司帮你解决了。这样省时省力，专心做下面的实验。

• tianmei001 (2014-1-14 23:01:41)

  我要分离一分子量为30kd的蛋白，用了G50的葡聚糖的柱子后，后面的总蛋白浓缩，过了透析膜后，蛋白量丢失了很多，换成超滤管，量是上来了，但是还是没有分离开，过了30的超滤管后还有很多60多kd的蛋白，总是分离开 ，高手们有什么高招可以分离开来！谢谢献计献策，感激不尽呀！SmileSmile
  
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  透析膜的孔径不均匀，所以你的蛋白会丢失较多，而超滤管的孔径相对较为均匀蛋白的收率较高，超滤仅适合分离分子量差别3倍以上的物质。
  先查找相关文献，了解一下你蛋白的特性在确定方案。
  如果你想将30K和60K的两种蛋白分开，而要得到的蛋白数量又不多的话可以用分子筛，装填的柱子踏板数要够，所用的缓冲液要保证你的蛋白在该种环境下稳定。用离子交换最好查一下你目的蛋白的PI，或做个2D测一下；疏水层析也可以，做阶度洗脱，逐个峰检测。
  

• gemei0115 (2014-1-14 23:02:02)

  
  更正一下：超滤适合分离分子量相差10倍以上的两种蛋白，差2-3倍肯定分不开的。
  建议尝试其他的层析技术。
  另外，你的分子量测定是跑SDS-PAGE吗？如果是，那就不要按电泳条带来选分子筛填料了，因为溶液中的蛋白未必以单体形式存在。

• dodoit (2014-1-14 23:40:56)

  谢谢，是的也许是聚合体，我不是想通过超滤管完全分离，是想大部分分离，可是我们超滤后的做werston根本做不出来，浓度太低了 ，不知道迷你型的超滤管是否可以？

• hyuu (2014-1-14 23:42:50)

  超滤管 分离效果好不好啊？我一向只是拿它来做浓缩的。楼主要是做得好，把电泳结果分享一下呗。
  另外，如果是多聚体，很有可能在溶液中存在着 单体--多聚体 平衡的关系。当心超滤去除了 单体以后，因为受平衡常熟的影响，多聚体解聚成为单体，从而又被过滤丢失，导致最后目的蛋白质完全丢失。

• ha111 (2014-1-14 23:43:05)

  
  反相好不好，通过疏水性分离？

• wood533 (2014-1-14 23:43:27)

  我还是建议查一下目的蛋白的PI用离子交换或根据其表面氨基酸性质用IMAC进行尝试。

• lyxsqs (2014-1-14 23:43:49)

  
  接后半段