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【求助】蛋白问题

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-1-14 23:53    作者: damingxia0904    来源: 分析测试百科网

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【求助】蛋白问题

我想问一下：我做蛋白表达最后用上样缓冲液重悬蛋白样品，经过处理之后，取的上清上样，还剩一部分样品我放在室温一天多，蛋白能降解多少啊？还能继
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  • ero11 (2014-1-14 23:53:21)


    这个，即使加了蛋白酶抑制剂也不好说。降解是肯定的，具体多少，还能不能用
    的试试才知道。

  • idoww (2014-1-14 23:53:41)

    不好说，如果你的蛋白稳定加完loading buffer后放置室温一天多是没问题的；如果不稳定就只能通过检测来判断了。

  • damingxia0904 (2014-1-14 23:53:59)

    那我再跑电泳的话，加了loading剩余的蛋白还用再加热变性吗？还是直接加样跑就行？

  • idoww (2014-1-14 23:54:19)


    沸水加热1-2min即可

  • damingxia0904 (2014-1-14 23:54:41)


    跑SDS-PAGE电泳之前准备的制胶过程是得用去离子水洗板吗

  • idoww (2014-1-14 23:55:11)

    蒸馏水也可以，无论用什么水都要保证将板洗干净，玻璃板干燥后无斑迹。

  • damingxia0904 (2014-1-14 23:55:27)


    我想问一下，跑SDS-PAGE电泳需要上样多少？

  • idoww (2014-1-14 23:55:48)


    取决于你跑电泳的目的和你胶的厚度以0.75mm的胶为例，如果只是想看到目的条带，加入1-2微克足够，如果还想通过电泳来判断样品的纯度可以加到5-10微克。

  • damingxia0904 (2014-1-14 23:56:08)


    我的胶厚度是1.0mm，我的目的是只想看到目的条带，那需要加多少微升？因为我没有蛋白定量，不知道微克是什么概念？望指导

  • idoww (2014-1-14 23:56:26)


    不知浓度没办法判断绝对上样量，你是纯品还是培养液？如果是细胞培养液加10（有血清）和20（无血清）；菌体一般加10即可；
    如果是纯品可以摇晃一下，如果泡沫很多加3-5微升即可，如果很少就加20微升。

  • damingxia0904 (2014-1-14 23:56:42)


    我的是菌体，那加10吧。我上一次加20，然后带就不清晰
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