【求助】GST融合蛋白诱导如何避免形成包涵体

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-1-15 23:13 作者: 芙蓉宫主来源: 分析测试百科网

我最近做GST融合蛋白。质粒为PGEX-4T-2，表达菌株为Rosetta gami 2.做了24度30度诱导发现形成包涵体，可溶蛋白不多。请问各位高手，如何来避免形成包涵体啊？谢谢大家

guagua (2014-1-15 23:14:04)

温度再低一点，试试20度或更低。温度高，蛋白表达量高，来不及折叠就容易形成包涵体
芙蓉宫主 (2014-1-15 23:14:35)

QUOTE:
原帖由 guagua 于 2014-1-15 23:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

温度再低一点，试试20度或更低。温度高，蛋白表达量高，来不及折叠就容易形成包涵体

试验了好久还是不行，现在只能做透析复性了
芙蓉宫主 (2014-1-15 23:14:56)

好像GST融合表达的可溶性本来就不高的吧
我们实验室做过的融合表达 GST融合的基本是包涵体
想提高可溶性还是推荐trxA 分子量小可溶性好
不行的话只能换DsbA、MBP、NusA之类大点的融合标签了
ps NusA据说是人类发现的可溶性最好的融合标签但分子量也是相当的大哈哈
quiqui008 (2014-1-15 23:15:15)

再低一下温度
koook5695 (2014-1-15 23:15:31)

GST融合表达的蛋白其实倾向是可溶性表达的，但更多的融合蛋白事与愿违，不过事已至此，要不更换novagen的trxA、NusA载体，要不就做包涵体复性吧。
TAT (2014-1-15 23:15:49)

同时也要改变诱导剂的添加量，做个梯度，诱导剂倍比往下减，设计个正交试验，就可以筛选出较好的条件。
any333 (2014-1-15 23:16:07)

使用pCOLD-SUMO或pCOLD TF VECTOR带有分子伴侣可助折叠，并在低温下诱导蛋白表达，最大限度的提高蛋白的可溶性。