【求助】235分子量该用百分之几的胶？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-1-17 16:08 作者: 30moonriver 来源: 分析测试百科网

各位高手，我最近要做一个分子量在235kDa，同时有一个additional band在40kDa的蛋白，不知道该用百分之几的胶啊？十分感谢先！

avi317 (2014-1-17 16:08:27)

最理想的状况是做梯度胶。如果只想用单一浓度胶，那么8%的分离胶是最合适的，不过要看的两条蛋白带是顶天立地了。
ending (2014-1-17 16:08:48)

是的，6、7、8%得胶都可以选择。看好Marker得位置确定电泳时间。
30moonriver (2014-1-17 16:09:11)

我想先用8%的胶试试，但如果以200mI 转膜的话，转膜时间3h够吗？
greenbee (2014-1-17 16:10:00)

如果你想两条带都做WB的话3h对于40K的就跑出去了，这条带建议你膜后面再加一层0.2的膜，孵育后都曝光，防止蛋白转过了。
30moonriver (2014-1-17 16:11:31)

我有个师姐建议100mI转膜过夜，然后再想你说的那样在后面再加层膜，能行吧？！
谢谢哈
30moonriver (2014-1-17 16:11:57)

最后我用8%的胶，转膜200mA 5个小时，效果很不错：）
NBA (2014-1-17 16:12:16)

我有个建议
用DYXZ-24E型电泳槽，分离胶高度在10cm左右
8%分离胶能有效分离235K的蛋白
转膜时可以根据预染M分子量把胶切了之后转膜
235K与beta-actin用不同的转膜时间
建议是湿转：因为湿转有两个模块，中间时间到了beta-actin可以先拿出来