【求助】为什么等量上样条带却粗细不一？

最新回复

• lorri (2014-1-19 11:07:35)

  补充一下：我做的是beta－actin的内参，样品是同一管的。

• pulala (2014-1-19 11:08:18)

  转膜的时间一样吗？转膜时间和效率会影响结果，条带粗细不一样也还是正常的吧？

• ROSE李 (2014-1-19 11:08:34)

  
  上养之前应该在振荡器上震荡一下。每次加样用枪吹打均匀！注意枪头上的挂壁的。

• ALALA (2014-1-19 11:08:55)

  首先如果你所有的实验条件都一样（用同一张默做实验），那么问题肯定出在上样这一环节。如果你的样品浓度比较大，那么你的上样体积就比较小。这样的话你的上样体积可能不是很准确，那么你所说的等量上样也就不存在，因此出现条带粗细不一的情况。

• lorri (2014-1-19 11:09:17)

  
  转膜的时间一样吗？转膜时间和效率会影响结果，条带粗细不一样也还是正常的吧？
  同一张膜的各孔下的条带粗细不一

• lorri (2014-1-19 11:31:55)

  QUOTE:

  原帖由 ROSE李 于 2014-1-19 11:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  上养之前应该在振荡器上震荡一下。每次加样用枪吹打均匀！注意枪头上的挂壁的。

  我觉得因为样品有沉淀，混匀上样会影响条带，所以每次上样前都离心先

• lorri (2014-1-19 11:32:11)

  QUOTE:

  原帖由 ALALA 于 2014-1-19 11:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  首先如果你所有的实验条件都一样（用同一张默做实验），那么问题肯定出在上样这一环节。如果你的样品浓度比较大，那么你的上样体积就比较小。这样的话你的上样体积可能不是很准确，那么你所说的等量上样也就不存在，因此出现条带 ...

  我的样品浓度一般是几到十几微克每微升，算不算大？

• veiwu (2014-1-19 11:32:33)

  
  为什么等量上样条带却粗细不一？
  楼主交代不带清楚:
  1)同一次实验粗细不一？我做的是beta－actin的内参，这个只能是上样的问题，即使楼主是等量上样，可能由于枪等原因导致实际上样体积有出入所致粗细不一。内参的作用就在于此，防止操作所带来的误差。
  2）不同次实验，等量上样条带却粗细不一？
  由于抗体孵育时间以及抗体是否是回收，实际温度等多因素导致。

• lorri (2014-1-19 11:33:12)

  QUOTE:

  原帖由 veiwu 于 2014-1-19 11:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  为什么等量上样条带却粗细不一？
  楼主交代不带清楚:
  1)同一次实验粗细不一？我做的是beta－actin的内参，这个只能是上样的问题，即使楼主是等量上样，可能由于枪等原因导致实际上样体积有出入所致粗细不一。内参的作用就在于此， ...

  我说的是同一次啊，一张膜上条带粗细不一。
  请问除了上样量还有什么可能吗？（因为我觉得上样量差别应该很小但条带相差却很明显。）

• yes4 (2014-1-19 11:33:41)

  我的样品浓度一般是几到十几微克每微升，算不算大？
  
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  浓度算大的了，上样量是多少微升啊
  另外上样前吧上清洗出来混匀后上样。

• 49888 (2014-1-19 11:35:23)

  我觉得因为样品有沉淀，混匀上样会影响条带，所以每次上样前都离心先
  
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  我感觉一定要混匀，我一开始没有混均匀就是条带不一致。建议试试我这个。如果可以给个消息。加样可以用微量注射器！这样更准确，买个50ul的那种，几十块钱！

• yyaxw84 (2014-1-19 11:35:46)

  
  蛋白浓度太高了，一般维持在7ug/ul左右比较合适。