【求助】荧光瞬间淬灭是什么原因？

最新回复

• txwuyan (2014-1-19 12:41:02)

  
  我想做gst pull down，请问用western如何定量。

• wawa (2014-1-19 12:41:40)

  QUOTE:

  原帖由 fklo83 于 2014-1-19 12:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  今天做WB的时候加完ECL后，发现条带的荧光很强，很高兴，正准备压片的，突然发现荧光突然就没有啦，感觉好奇怪啊。我的速度和以往做的时候差不多，没有很慢啊。就是在我放入薄膜的时候，还没来得及压片。是什么原因啊？？？请各位高手指 ...

  肯能是二抗与ECL结合结合部位瞬间消耗的原因吧！也可能是由于接触到金属物品，荧光瞬间淬灭了。

• fklo83 (2014-1-19 12:41:59)

  
  为什么会瞬间消耗呢？我只是用小镊子把膜移到薄膜上而已，以前也是这么做的，没有出现这种问题。这两天都出现了这种现象，不知道是怎么回事啊。眼睁睁的看着我的条带没了，爆不了光，真是痛苦啊！

• panda王 (2014-1-19 12:43:42)

  
  也可能是浓度太高，你可以在暗室将荧光试剂现加在膜上，然后马上放胶片

• ffaa (2014-1-19 12:44:09)

  
  我以前也碰到过类似情况，荧光在十几秒就消失了，最后我分析可能有2个原因，1是系统有未知的物质干扰二抗的酶活性，2是夏天温度高，如果二抗重复用的话或者室温下孵育过长时间的话有可能出现这种问题，现在我们的二抗都是新配，呵呵

• 了了 (2014-1-19 12:44:49)

  
  我们以前也遇到过类似的情况，把二抗浓度降低就好了！

• fklo83 (2014-1-19 12:45:06)

  
  今天做荧光又没有淬灭，不知道是什么原因。所用的条件是一样的。我所用的二抗每次都是新配的，而且浓度是1：3000，一直都是用的这个浓度，还是不知道原因出在哪里？

• 3648755 (2014-1-19 12:45:34)

  
  我们也遇到过这个问题，而且其它实验室的老师也说过遇到过，就是都找不到原因，怀疑是操作过程中可能不知道是什么小细节使PH值改变了~

• fklo83 (2014-1-19 12:46:14)

  
  我也觉得可能是个小细节变化，应该与二抗浓度，或者其他的操作无关，因为一直都是摸好的浓度，以前从没出现过这种情况，而且最近这两次又没有出现荧光瞬间淬灭的现象啦，所有的操作步骤都是一样的。
  或许是楼上所说的小细节造成PH值改变，具体原因始终找不出来。
  如果下次遇到这种现象，只能重新孵抗体啦。

• cwcwcww (2014-1-19 12:46:41)

  调整下二抗浓度试试吧，我也遇到过，两条带除了二抗浓度不一样，其他都一样，二抗浓度低的很快就淬灭了

• cwcwcww (2014-1-19 12:47:11)

  跟你的一抗浓度也有关系，其他的一抗都没有遇到过

• sunnyB (2014-1-19 12:47:30)

  
  原理不就是HRp催化底物发光吗？可能是二抗浓度高了，底物被瞬间消耗了，还有就是如果荧光是肉眼可见的，不一定是好事吧，这样结果虽然是肯定阳性了，但条带肯定很难看吧？

• okhaha (2014-1-19 12:47:58)

  
  二抗浓度过高，降低二抗浓度

• 49888 (2014-1-19 12:48:25)

  
  用哪个公司的ECL? 我用普利莱的，很强的条带也不会催灭

• fklo83 (2014-1-19 12:48:43)

  piece增强型的那种，我相信与ECL无关

• yhz1973 (2014-1-19 12:49:30)

  
  可能原因：
  1 二抗浓度过高，底物消耗太快；
  2 接触到金属物品；
  3 接触到显影液使荧光猝灭

• zhezhe (2014-1-19 12:50:28)

  piece增强型的那种，我相信与ECL无关
  
  ======================================================
  
  如果是很亮的话，把上样量减少，二抗浓度降低就可以了，没问题的！

• 小荷尖尖 (2014-1-19 12:51:09)

  
  直接找个塑封袋，在里面配好ECL 加入你的膜，排气封口混匀后直接压片。可以解决你的问题，但是条带稍显模糊。