【求助】 分子量35蛋白湿转条件

最新回复

• ritou1985 (2014-1-24 16:22:41)

  
  这么小的还真没转过，我觉得你可能要摸索几次，主要是转移缓冲液中的SDS的量，转膜时的电流，还有膜的选择，转膜时间的把握，这些都要注意。多摸索几次吧，转弯染一下胶看看！

• jude (2014-1-24 16:23:03)

  
  要是有人做过就好了　就差转膜条件

• 131415 (2014-1-24 16:24:31)

  
  我做过33kd的蛋白。
  1.建议35kd的分子量，转膜可以使用300mA湿转1小时，或者350mA转40分钟；
  2.首次做的话，建议用双层膜，防止过转透膜；
  3.转膜后最好丽春红染一下，看看有没有条带，条带或泳道染的如何，深浅，整齐度等，同时可以逐渐摸索自己蛋白的丰度情况；
  转膜是western的分水岭，重要性不言而喻，望慎重摸条件
  祝顺利

• jude (2014-1-24 16:25:04)

  
  ３００ｍａ电流是不是有点大啊　我们内参４２　湿转２００ｍａ　６０ｍｉｎ就出来了

• yes4 (2014-1-24 16:25:42)

  
  我转过38KD的蛋白,湿转,25V电压,60min
  transfer buffer:Tris 5.82g, glycine 2.93g SDS 0.37g,加1L水灭菌,用前加200mlMeOH,在低温转
  很容易成功的

• seven7 (2014-1-24 16:26:03)

  
  首先如果你的蛋白表达不多或者很难出来的话, 可以选用0.22um的PVDF膜
  如果是这个膜的话, 200mA, 90min, 或者300mA, 60min都是没问题的

• rxcc33 (2014-1-24 16:27:10)

  
  30kd100ma30min可以

• taoshengyijiu (2014-1-24 16:32:20)

  
  小蛋白是不是很容易转过啊，是不是减小电压减少时间就行了

• yonger (2014-1-24 16:32:38)

  
  
  我是10或12%的胶，110V湿转90min（mini gel），冰浴；
  用的是0.2um的NC膜，效果还不错。

• DONT (2014-1-24 16:33:12)

  
  电压　时间不是那么简单的相对减少就可以了　个人意见