【求助】2-D Clean-Up处理后，蛋白难溶，如何解决？

最新回复

• BOSS2011 (2014-1-24 16:34:45)

  
  干透了就结块了
  这个是沉淀法 类似于丙酮 TCA的方法
  不信 你用丙酮试试（这个便宜）
  干透了就不好溶了

• chenshuanhe (2014-1-24 16:35:05)

  
  由于样品特殊，用丙酮除杂质效果不佳，用Kit效果不错，就是比较难溶
  用超声促溶可不可以？

• chenshuanhe (2014-1-24 16:40:37)

  你没理解 我说的是沉淀不要干透 溶解就可以了

• chenshuanhe (2014-1-24 16:41:51)

  
  不好意思，比较笨，呵呵
  下次试试，老是怕有机溶剂挥发不干净。

• ladyhuahua (2014-1-24 16:42:46)

  
  不知道楼主用的是不是GE公司的clean up kit
  我现在也是在做这个，可以谈一点自己的看法
  我也遇到过沉淀不溶解的问题，当然也有不要干透等等问题
  但是我经过摸索发现，最关键的是做clean up 第一步加precipitant 之前，sample protein 的浓度不能太高，可以做dilution，一定要让做出来的沉淀，呈现细粉状，不能一下就呈团。一下子呈团了，后面不能打散，出来的沉淀很难溶解，希望对楼主有点帮助。

• 3648755 (2014-1-24 16:44:47)

  QUOTE:

  原帖由 ladyhuahua 于 2014-1-24 16:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  不知道楼主用的是不是GE公司的clean up kit
  我现在也是在做这个，可以谈一点自己的看法
  我也遇到过沉淀不溶解的问题，当然也有不要干透等等问题
  但是我经过摸索发现，最关键的是做clean up 第一步加precipitant 之前，sampl ...

  一般处理一次可以得到多少蛋白？

• ladyhuahua (2014-1-24 16:45:23)

  我一般会同一个sample，同时做几个clean up 的tube，复溶后混合上清测定浓度，然后分装为5～6个上样单位，我每次上样100mg，每个sample至少做三次重复。

• 49888 (2014-1-24 16:45:42)

  
  您好，听说clean-up的除盐效果很好，我也想使用，但我的样本体积比较大，不知有没有更好的办法