【求助】蛋白质截留分子量（cut-off）三问

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-1-24 21:53 作者: coolcool 来源: 分析测试百科网

今有81KD的蛋白：
1、如果要透析复性，该选用多大规格的透析袋？
2、如果用超滤管浓缩，该选用怎样规格的超滤管？
3、如果选用PEG浓缩，该选用分子量多大的PEG？
谢谢啊。如果某君能有理有据地答复，建议斑竹置顶，以解决多人的此方面困惑。

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【求助】蛋白质截留分子量（cut-off）三问

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最新回复

skytree (2014-1-24 21:54:14)

1、如果要透析复性，该选用多大规格的透析袋？
透析选择透析袋最主要能保证蛋白不会出来.
所以10K(很常用的）就可以了,
2、如果用超滤管浓缩，该选用怎样规格的超滤管？
用超滤管浓缩最主要能保证蛋白不会被离心出来.
所以10K(很常用的）就可以了,
3、如果选用PEG浓缩，该选用分子量多大的PEG？
选用PEG浓缩最主要能保证不会进到透析袋中
所以可以用PEG 20000
coolcool (2014-1-24 21:54:46)

QUOTE:
原帖由 skytree 于 2014-1-24 21:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

1、如果要透析复性，该选用多大规格的透析袋？
透析选择透析袋最主要能保证蛋白不会出来.
所以10K(很常用的）就可以了,
2、如果用超滤管浓缩，该选用怎样规格的超滤管？
用超滤管浓缩最主要能保证蛋白不会被离心出来.
所以10K ...
楼上是否弄错了，我的蛋白81KD哦！
小荷尖尖 (2014-1-24 21:55:07)

请教下浓缩和透析对蛋白的活性有影响吧？
skytree (2014-1-24 21:56:10)

QUOTE:
原帖由 coolcool 于 2014-1-24 21:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

楼上是否弄错了，我的蛋白81KD哦！
知道啊,推荐10K因为比较常用,买来一卷以后透析其他分子量蛋白质也可以用啊.只要你的蛋白分子量小于透析规格的80%,那蛋白就不会跑到透析袋外面.
如果你以后不透析其他分子量蛋白质,那就买30K/ 50K 以都可以.
skytree (2014-1-24 21:56:46)

QUOTE:
原帖由 小荷尖尖 于 2014-1-24 21:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
请教下浓缩和透析对蛋白的活性有影响吧？
偶尔会有影响!
当透析外液与原来组分差别比较大的时候可能会有失活的现象.
cwcwcww (2014-1-24 21:57:13)

一般推荐蛋白分子量在选用的浓缩管的截留分子量的1/3以下，所以10kD是合适的。
bling (2014-1-24 21:57:30)

一般，在选用超滤膜的时候，分子量为目的蛋白的1/3或者3倍。
所以，你用超滤浓缩时，用30kd的超滤管应该没有问题，只是比10kd的损失比较大点。但如果含目标成分的液体比较粘，那30kd更合适。
选用透析袋做复性，如果不涉及分离小分子物质，可以选用10kd的透析袋都可以。如果还有低于30kd的小分子，那用30kd的进行透析复性的同时还可以去掉一部分杂蛋白。
小荷尖尖 (2014-1-24 21:58:25)

QUOTE:
原帖由 bling 于 2014-1-24 21:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

一般，在选用超滤膜的时候，分子量为目的蛋白的1/3或者3倍。
所以，你用超滤浓缩时，用30kd的超滤管应该没有问题，只是比10kd的损失比较大点。但如果含目标成分的液体比较粘，那30kd更合适。
选用透析袋做复性，如果不涉及分离小 ...
谢谢！继续请教下透析会使样品的浓度稀释？大概需要多少样品？