【求助】直接用5×的loading buffer上样会影响Western 结果吗？

最新回复

• 2541 (2014-1-25 11:18:20)

  
  答案是很可能会，为什么，因为5×的loading buffer很稠，浓度比较高，而一般上样需要5×的loading buffer 2-4ul不等，尤其是新手，很难保证上样量的准确，很可能粘在枪头上的液体比你吸出来的还要多，而打出来的可能又要丢失一部分，一来二去，这样就会造成上样量的不准确，
  那么在跑胶的时候，各条带酒不会那么整齐，难以成为一条直线，那么就会对后来的压片结果产生影响，
  可以说，western结果的漂亮与否，用一句话来总结，就是：
  细节决定成败！
  对于这事，我的处理方法是将5×的loading buffer按照3：1的比例，用PBS稀释，稍微稀释过的loading buffer上样量就会均匀、准确，希望对你有所帮助，祝顺利！

• wsll (2014-1-25 11:18:42)

  
  支持 以前偶喜欢用2*的

• jkobn (2014-1-25 11:19:01)

  
  二楼太专业了，讲的也很漂亮。理论上100%正确呀。
  不过，根据俺的经验，没有什么影响，放心就是。如果结果出来后感觉不完美，再做一遍就是。不必天天上升的理论完美的高度。不然天天实验不累死人啊。

• eric930 (2014-1-25 11:19:24)

  
  楼主，没有关系的。
  关于5*黏稠的问题，楼主可以将其充分化掉以后，倾斜ep管，将loading buffer斜斜倒出，流到管子口的时候，就可以用枪头准确的吸取了。
  本人用碧云天的loading buffer。其他的应该也差不多吧

• zsxan1990 (2014-1-25 11:19:56)

  
  loading buffer应该用自己配的没问题吧

• tangxin_80 (2014-1-25 11:20:37)

  QUOTE:

  原帖由 zsxan1990 于 2014-1-25 11:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  loading buffer应该用自己配的没问题吧

  没问题，自己配的既省钱，用起来也不怕废

• 66小飞侠 (2014-1-25 11:21:00)

  
  请问你们用的loadingbuffer碧云天的5x的再从冰箱拿出之后要到37度温育吗？还是从冰箱拿出直接使用？

• abc816 (2014-1-25 11:21:32)

  
  5×loading buffer在用之前最好温育一下，然后震荡混匀（主要是里面的SDS经常会沉淀出来）离心，而且使用的时间长了还应该补加2-巯基乙醇。