转载：
①首先，梯度凝胶比单一浓度凝胶的分离范围更宽，可以同时分离较大范围分子量的蛋白质。单一凝胶电泳对于分子量超过其分离范围的蛋白质，过大或过小，都不能分离。而梯度凝胶孔径范围比单一凝胶大，分子量较大的蛋白质可以在凝胶顶部大孔径部分得到分离，而分子量较小的蛋白质可以在凝胶底部小孔径部分得到分离，所以分子量较大和较小的蛋白质可以同时得到分离。例如用4％～30％的梯度胶可以分离分子量5万～200万的蛋白质。
② 另一个优点是梯度凝胶可以分辨分子量相差较小，在单一浓度凝胶中不能分辨的蛋白质。电泳过程中，蛋白质在梯度凝胶中迁移，经过的孔径越来越小，直到凝胶的孔径不能通透，这样电泳过程中蛋白质就被浓缩，集中在一个很窄的区带中。而分子量略小的蛋白质可以迁移得更靠前一些，被集中在略前面的区带中。由于梯度凝胶孔径逐步变小，在蛋白质不能通透的孔径附近对蛋白有浓缩作用，所以电泳后形成很窄的区带，可以分辨出分子量相差较小的蛋白质。对于太稀的样品，在电泳过程中可以将样品分几次加样，大小不同的蛋白质分子最终都会滞留在其相应的凝胶孔径中而得到分离。
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yychen (2014-1-25 15:10:09)
fsdd817 (2014-1-25 15:10:31)
转载：
①首先，梯度凝胶比单一浓度凝胶的分离范围更宽，可以同时分离较大范围分子量的蛋白质。单一凝胶电泳对于分子量超过其分离范围的蛋白质，过大或过小，都不能分离。而梯度凝胶孔径范围比单一凝胶大，分子量较大的蛋白质可以在凝胶顶部大孔径部分得到分离，而分子量较小的蛋白质可以在凝胶底部小孔径部分得到分离，所以分子量较大和较小的蛋白质可以同时得到分离。例如用4％～30％的梯度胶可以分离分子量5万～200万的蛋白质。
② 另一个优点是梯度凝胶可以分辨分子量相差较小，在单一浓度凝胶中不能分辨的蛋白质。电泳过程中，蛋白质在梯度凝胶中迁移，经过的孔径越来越小，直到凝胶的孔径不能通透，这样电泳过程中蛋白质就被浓缩，集中在一个很窄的区带中。而分子量略小的蛋白质可以迁移得更靠前一些，被集中在略前面的区带中。由于梯度凝胶孔径逐步变小，在蛋白质不能通透的孔径附近对蛋白有浓缩作用，所以电泳后形成很窄的区带，可以分辨出分子量相差较小的蛋白质。对于太稀的样品，在电泳过程中可以将样品分几次加样，大小不同的蛋白质分子最终都会滞留在其相应的凝胶孔径中而得到分离。
fsdd817 (2014-1-25 15:10:50)
54149298.jpg
fsdd817 (2014-1-25 15:11:09)
同样的sample，10%的胶，
13590075.jpg
fsdd817 (2014-1-25 15:11:25)
不过梯度胶灌起来确实太麻烦，
几乎所有的操作手册上都用的是加取代液的方法，储存腔放heavy solution，混合腔放light solution，light 被下面heavy的 push到上面，一点一点堆积，形成梯度，这个方法可以理解，
但是我们实验室还不是用那种加取代液的方法：
V形橡胶垫还是放在底部，储存腔放light solution，混合腔放heavy solution，
灌胶的时候从底部橡胶垫的小凹槽处一点一点向上涌，看起来像喷泉，想不通这样的方法能产生底部是高密度的，顶部是低密度的胶吗？
难道说heavy的先进入玻璃板，往两边走，铺到底层，light从底部中央凹槽 一点一点上去？这样会不会造成整个胶中央的部分浓度跟两侧不一样？
有做过梯度胶的高手可以解释一下吗？
fsdd817 (2014-1-25 15:11:50)
请大家帮忙分析一下 我的9%～17%的梯度胶的那张图聚焦的效果怎么样？
8princess8 (2014-1-25 15:12:29)
下部梯度不均匀 灌胶不够轻缓
你做的是PH3-10非线性吗
建议选择蛋白点密集区 做相应PH范围的线性胶
fsdd817 (2014-1-25 15:12:48)
【求助】用梯度胶还是用单一浓度胶好？