【求助】蛋白条带为什么总是连到一起？

最新回复

• ero11 (2014-1-25 16:56:21)

  
  可能原因：
  1：上样量太大
  2:你配的胶有问题

• orangecake (2014-1-25 16:56:45)

  不要自动分析，可以用
  因为显影的时候条带还是从一个中心开始变黑
  然后才相互连起来，所以减少压片时间，显影时间可以解决
  或者增加点胶浓度，跑的时候冰浴，降低条带横向扩散

• birdfish (2014-1-25 16:57:14)

  QUOTE:

  原帖由 orangecake 于 2014-1-25 16:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  不要自动分析，可以用
  因为显影的时候条带还是从一个中心开始变黑
  然后才相互连起来，所以减少压片时间，显影时间可以解决
  或者增加点胶浓度，跑的时候冰浴，降低条带横向扩散 ...

  不自动分析，可以用吗？但我查到的文献都没有这样的呀！
  我下次试试减短时间看看，我用的胶是8%积层胶，12%分离胶，有更好的建议？
  

• JK.jon (2014-1-25 16:57:33)

  
  什么是自动分析啊？是不是bandscan？
  可以做个半定量，不过很多情况下，wb的数据都会把“从多变少”通过压片显影等等变成“从少变无”，有相当多的杂志不要求定量的：）实在要定量也可以把细胞裂了做Elisa：）

• jingling845 (2014-1-25 16:57:50)

  
  wb时连成一条线可能有以下几种原因：
  1）上样量过大 2）一抗孵育时间过长 3）一抗浓度过大 4）曝光时间过长
  按照自己具体实验经验调节。
  但是lz上样是7ul，认为这种上样方法不妥，应该根据浓度折算成上样质量数，这样就能与以往实验比较（不连成一条线时），是否是上样量过大的问题。

• birdfish (2014-1-25 16:58:08)

  考虑是胶的问题，下次试试积层胶少一些，是不是分得开得，另外，减少曝光时间！

• remenb (2014-1-25 16:59:40)

  
  如果样品充足的话，把一种样品按逐渐增加上样量的方法，如第一个孔上样5uM，第二孔10uM，然后15，20，30…………然后决定上样量或者曝光时间怎样？

• birdfish (2014-1-25 17:01:00)

  
  我意思是说条带会连到一起，不是曝光不出来，另外，上样量貌似最大是20ul，不过，还是谢谢您

• birdfish (2014-1-25 17:01:22)

  电泳蛋白扩散是个问题，但怎么防止呢？？

• xyw5 (2014-1-25 17:01:55)

  可能是上样量太高，调高分离胶的浓度试一下，我以前也遇到这种问题，可以搞定

• tuuu2 (2014-1-25 17:02:39)

  
  你说蛋白扩散是个问题，你怎么肯定条带连在一起一定是蛋白扩散而不是蛋白量太多或者抗体孵育时间太长？
  你说上样量是7ul,

• tuuu2 (2014-1-25 17:03:10)

  
  抱歉，不小心没写完就发上去了
  你说上样量是7ul, 所以认为上样量不是很多，但如果你的样品密度很大的话即时你上样的容积量不是很多蛋白量也是很多的。有的蛋白只要上样10uM（微摩尔）一抗室温俩小时也是显影时非常强烈的。
  我觉得上面的几位的建议非常不错，就是上样量或者抗体时间的问题。